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β—半乳糖苷酶标记试剂

阅读:599          发布时间:2010-9-25

β—半乳糖苷酶已被广泛用于酶标记免疫分析,但主要用于免疫细胞化学。一种较好的底物是5—溴—4—氯—3—吲哚—β—D—吡喃型半乳糖苷(BCIG),它可以产生一种深蓝色的产物。此产物在乙醇和水中稳定,不溶解。

1.需要的溶液、试剂和特殊设备
BCIG;
N,N—二甲基甲酰胺;
1mmol/LMgCl2;
3mmol/L亚铁氰化钾用PBS溶解,DPX。
光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。

2.操作步骤
(1)用0.1mlDMF溶解4.9mgBCIG。
(2)加0.1mlBCIG溶液至10ml含有1 mmol/L MgCl2 3retool/L亚铁氰化钾的PBS中。
(3)滤纸过滤。
(4)加此溶液至标本,在室温孵育10~40min,用水冲洗终止反应。
(5)优化:如果需要,进行复染。
(6)用DPX封片。

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