（1）试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯规定的二级水。 水为符合GB／T 6682
①新霉素标准品
②磷酸氢二钾
③磷酸二氢钾
④氢氧化钠
⑤蛋白胨 生化试剂
⑥琼脂 生化试剂
⑦酵母粉 生化试剂
⑧牛肉膏 生化试剂
⑨葡萄糖
⑩氯化钠
⑾灭菌磷酸盐缓冲溶液（0．1mol／L，pH 8．o） 准确称取16．73g无水磷酸氢二钾和0．523g无水磷酸二氢钾，加水溶解并稀释至1000ml。121~C灭菌20min，备用。
⑿新霉素标准溶液 准确称取适量（不低于20mg）新霉素标准品，加灭菌磷酸盐缓冲溶液（o．1mol／l pH 8．o）溶解，并稀释成浓度为100bg／m1的标准储备液，真空抽滤后，置4~C冰箱中保存有效期4周。
（2）仪器设备
①平底双碟 直径约90mm，高16～17mm
②牛津杯 不锈钢，高10．0mm，外径8．0mm内径6．0mm
③游标卡尺 度o．02mm
④旋涡混合器
⑤真空泵
⑥离心机
⑦分光光度计
⑧恒温电热水浴箱
⑨分析天平 感量o．0001g
⑩电热恒温培养箱
（3）测定步骤
①菌悬液的制备 将表皮葡萄球菌26069型在新鲜培养基I上连续传代3次后，用适
量0．85％NaCl灭菌溶液冲洗斜面培养物并稀释成菌悬液。在560nm波长下，菌悬液的光
透过率控制在80％左右。菌悬液应新鲜制备。
②双碟的制备
底层 加10ml融化的培养基I于培养双碟中，均匀铺平，在平面上待其凝固。
菌层 在适量预先融化并维持在48~C的培养基Ⅱ中加入适量（通常o．2～o．5m1）新制备的菌悬液。充分混匀后，在每个含有底层的培养双碟中加入4．0mi。将培养双碟两边倾斜并作圆周旋转运动使培养基均匀分散铺平，并待其凝固。在使用的当天制备双碟。用标准品参照浓度工作液所得的抑菌圈直径应为（18土2．4）mm。
③标准曲线的制备 用o．1mol／L磷酸盐缓冲溶液（pH8．o）稀释新霉素标准品贮备液成浓度为2．4bg／ml、1．2／Lg／m1、0，6gg／m1、0。3／lg／ml、0．15bg／m1的系列标准工作液，以o．6ug／ml的标准溶液为标准品参照浓度工作液，按微生物琼脂扩散法测定各浓度的抑菌圈直径，在坐标纸上绘图，以各浓度的对数值为纵坐标，平均抑菌圈直径的校正值为横坐标绘制标准曲线。
④提取 称取（5±．05）g试料，置50ml塑料离心管中，加入10mlo．1mol几磷酸盐缓冲溶液（pH 8．O），置旋涡混合器上混合lmin，O～4~C静置30min，放入100~C水浴加热5rain，取出冷却，5000r／mill离心l5min，取上清液用lmol／L NaOH溶液调节至pH 8．0后作为试样溶液，供微生物学测定。
⑤测定 每个双碟间隔3个牛津杯滴加标准品参照浓度工作液，另3个牛津杯滴加试样溶液，每一样品重复3个双碟，32—35~C培养18～20h，量取抑菌圈直径，由标准曲线求取药物含量。
⑥空白试验 除不加试料外，采用*相同的测定步骤进行平行操作
（4）灵敏度和回收率
本方法在鸡组织中的检测限为500ug／kg。
在500ug／kg添加浓度水平上的回收率范围为80％～110％