原理
　　
　　叶绿素a、b在红光区的zui大吸收峰分别为663nm和645nm，可用以下联立方程求叶绿素溶液中的叶绿素a、b的含量。
　　
　　D663=82.04Ca9.27Cb……………………（1）
　　
　　D645=16.75Ca45.6Cb……………………（2）
　　
　　式中D663、D664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的光密度；Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度（g/L）；82.04、9.27分别为叶绿素a、b在波长663nm时的比吸收系数，16.75、46.6分别为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。
　　
　　解联立方程（1）、（2）则得：
　　
　　Ca=0.0127D663-0.00269D645……………（3）
　　
　　Cb=0.0229D645-0.00468D663……………（4）
　　
　　如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，（3）、（4）式则可改写为：
　　
　　Ca（mg/L）=12.7D663-2.69D645…………（5）
　　
　　Cb（mg/L）=22.9D645-4.68D663…………（6）
　　
　　叶绿素总量C（mg/L）=CaCb=20.2D6458.02D663……（7）
　　
　　叶绿素总量也可根据下式求导
　　
　　D652=34.5×C……………（8）
　　
　　652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点（等吸收点），34.5为叶绿素a、b在波长652nm处的吸收系数。
　　
　　DC=D652/34.5（g/L）Cd
　　
　　DC=D652×1000/34.5（mg/L）………（9）
　　
　　因此，利用（5）、（6）式可分别计算叶绿素a与b含量，利用（7）式或（9）式可计算叶绿素总量。
　　
　　叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。
　　
　　器材与试剂
　　
　　722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。
　　
　　方法与步骤
　　
　　1.提取叶绿素。
　　
　　2.测定光密度。
　　
　　在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液（浓度大时需稀释）。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长（测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量及总量选用663nm和645nm），在分光光度计上测定光密度。
　　
　　3.计算结果：把测定的光密度代入上述公式可求出比色杯中的叶绿素含量。如要计算样品中叶绿素含量时，需要考虑稀释因子。
　　
　　样品中叶绿素含量（mgChl/g鲜重或mgChl/ml叶绿体）
　　
　　D=比色杯中叶绿素含量×稀释倍数/样品量（g鲜重或ml叶绿体）
　　
　　注意事项
　　
　　用分光光度法测定物质含量时，分光光度计的波长调节要准确，参比杯与测定杯的透光率要一致。