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川芎不同入药形式的体外溶出与药效学比较
阅读：2404 发布时间：2011-8-5| 提 供 商 | 天津盛达三合光学仪器有限公司 | 资料大小 | 0K |
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川芎为临床常用中药，具有活血行气、祛风止痛的功效，主要用于月经不调、经闭痛经、头痛、风湿痹痛等症〔1〕。其成方制剂以治疗疼痛症较多。目前多应用全粉入药或水、醇等提取入药。为探讨其科学合理的用药形式，我们通过体外溶出试验，比较了川芎超微粉、细粉两种粉碎工艺及水提、醇提和双提3种提取工艺中阿魏酸的体外溶出量，并进行了镇痛作用的药效学比较试验，结果超微粉和醇提物阿魏酸的溶出量多，镇痛作用强。说明川芎的正确入药形式为：若以全粉入药，超微粉较细粉更能增加有效成分的溶出，提高药效。若要减少剂量用药，则以川芎醇提物入药为好。
1实验材料
1.1仪器
939型薄层自动铺板器（重庆南岸贝尔德仪器技术厂）；智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；CS-9301
薄层扫描仪（日本岛津）；82-1型离心机（上海医疗器械厂）。
1.2药材
川芎药材购自济南建联中药店，经山东省中医药研究所生药室鉴定为伞型科植物川芎Ligus-ticumChuanxiongHoort.的干燥根茎。
1.3试剂
所用试剂均匀为分析纯；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
1.4动物
昆明种小鼠，♀♂共用，体重18~22g、24~26g，由山东中医药大学动物实验中心提供。
2方法和结果
2.1样品制备
2.1.1川芎细粉将川芎粉碎成全部通过六号筛的粉末。
2.1.2川芎微粉将川芎超微粉碎成中心粒径10?m以下不少于95%的微粉。
2.1.3川芎水提物取川芎药材粉碎成粗粉。称取50g，加水煎煮两次，第1次10倍量水2h，第2次8倍量水1h，滤过，合并滤液，减压浓缩至稠膏，真空干燥，得干膏18.1g。
2.1.4川芎醇提物取川芎药材粉碎成粗粉，称取50g，加80%乙醇提取2次，每次8倍量，每次2h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，真空干燥，得干膏12.0g。
2.1.5川芎双提物取川芎药材粉碎成粗粉，称取50g，加水提取挥发油至尽，收集挥发油，提取液滤过，药渣加水煎煮1h，滤过，合并滤液，减压浓缩成稠膏，真空干燥，得干膏20.2g。
2.2溶出液制备
调节溶出仪水浴为37℃恒温，精密量取1000mL人工胃液置溶出仪的烧杯中，于恒温水浴中保温，搅拌转速设为100r·min-1。取粉碎样品，分别精密称定重量（细粉、超微粉称取约3g，提取物称取相当于原药材3g的干膏量）每组3份，置测定仪的烧杯中，人工胃液接触到样品时开始计时，1h后，取出液体，2000r·min-1离心20min。取上清液经滤膜过滤，即得供试溶出液。
2.3阿魏酸含量测定
2.3.1薄层层析及扫描条件取硅胶G，加0.2%的CMC-Na，自动铺板器铺成10cm×20cm×0.03cm的薄层板，105℃活化30min后置干燥器中保存，冷却后备用。正已烷-氯仿-冰醋酸（8：8：1）展开，展距8cm，双波长反射式锯齿扫描，λs=328nm，λR=370nm。
2.3.2标准曲线的绘制精密称取阿魏酸对照品约1mg，以甲醇溶解，转移至2mL量瓶中，加甲醇并稀释至刻度摇匀，作为对照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5?L点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开，取出、晾干，置紫外光下365nm处检视，定位，测定，结果表明阿魏酸在0.5~2.5?g之间上样量与斑点峰面积积分值呈线形关系，回归方程为Y=1124.68X+273.21，r=0.9992。
2.3.3样品测定精密吸取溶出液50mL，乙醚提取3次，每次50mL合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解，定容于2mL量瓶中，作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10?L，对照品溶液1?L和5?L点于同一硅胶G薄层板上，依法测定，测定结果见表1。（川芎原药材中阿魏酸的含量为0.0314%）。
2.4川芎不同粉碎度的镇痛作用
2.4.1对0.6%醋酸扭体法的镇痛作用比较♂小鼠60只，体重24~26g，按体重随机分为3组，分别给于各药物组灌胃，1次/日，连续3日，对照组给等体积的蒸馏水灌胃，末次给药后30min，逐只腹腔注射0.6%醋酸（0.1mL/10g鼠重），观察注射后出现*次扭体反应的时间及15min内的扭体次数，并进行组间统计学处理，结果见表2。
2.4.2对小鼠热板法镇痛作用比较雌性小鼠60只，体重18~20g，实验前预筛痛阈，以痛阈值大于5s，小于30s者为合格，而后随机分为3组，分别给药同2.4.1项，按热板法〔2〕测定其痛阈值，进行组间t检验。
3小结和讨论
实验结果表明，川芎的不同粉碎及提取工艺中，超微粉及醇提物中有效成分阿魏酸的溶出量较高，镇痛作用也较强。据文献报道，川芎挥发油中主要成分藁本内酯有拮抗子宫收缩的作用〔3〕。有机酸类成分阿魏酸有抗炎和镇痛作用〔4〕，但受热易破坏，在川芎水提和双提工艺中，因为高温和长时间的加热，阿魏酸大量损失。川芎超微粉因药材细胞已破壁，更有利于有效成分的溶出，故川芎超微粉与醇提物阿魏酸的溶出量较多，镇痛作用也较强。另外，其生物碱川芎嗪可较多的透过血脑屏障，是药效成分之一〔5〕。但此成分极易受热破坏，经过加热提取及浓缩过程已损失殆尽〔6〕。因没有购到川芎嗪的对照品，此部分工作尚需补充。
通过本次实验可以看出，川芎醇提取中阿魏酸的溶出量仅次于超微粉，而镇痛实验也证实醇提法强于水提法及双提法，仅次于超微粉及细粉。综合考虑，我们认为在剂型允许原药材粉入药的情况下，如散剂、蜜丸等，川芎的入药形式以超微粉为好，但若为液体制剂或需减少服用剂量的剂型，如滴丸等，川芎入药形式还是以醇提物为好。
超微细粉化技术近年来应用于中药的研究报道逐渐增多，它是利用振动对物料进行压缩式粉碎，可将以传统粉碎工艺得到的原生药粉末的粒度从150~200目（75μm以下），提高到中心粒径5~10μm以下，以达到细胞破壁的目的。这种新技术不仅可以全成分保留活性物质，而且可以使药材中的有效成分直接暴露出来，从而使药物吸收更加迅速、*〔7〕。中药有效成分的溶出与药物在体内的生物利用度之间存在着一定的相关性〔8,9〕。综合本研究实验结果可以看出，川芎超细微粉化入药或进行方剂的制剂工艺研究，是相对合理科学的。本研究亦为中药的超细微粉化研究提供了一个新的思路。
参考文献：
[1]中华人民共和国药典[S]北京：化学工业出版社.一部，2000：30.
[2]李仪奎.中国药理实验方法学[M].上海：上海科技出版社.1991：102.
[3]尾崎幸弘.川芎的药理和药效[J].国外医药·植物药分册.1994，9（4）：164
[4]刘鹰翔.四甲基呲嗪和阿魏酸的抗炎作用[J].国外医药·植物药分册.1993，8（2）：85.
[5]肖静.川芎嗪药理研究的新进展[J].华西药学杂志，1993，8（3）：170.
[6]北京制药工业研究所.川芎有效成分研究：川节嗪的提取，分离和结构鉴定[J].中华医学杂志.1977，57（8）：420-421.
[7]徐莲英，陶建生.中药制剂发展的回顾[J].中成药.2000，22（1）：6.
[8]刘产明，杨洪元.不同粉碎度三七体外溶出试验[J].中成药.1998，20（2）：17.
[9]杜晓敏，刘璐，何煜.生药材超细微粉制剂的药效学研究[J].中草药.1999，30（9）：680.
1实验材料
1.1仪器
939型薄层自动铺板器（重庆南岸贝尔德仪器技术厂）；智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；CS-9301
薄层扫描仪（日本岛津）；82-1型离心机（上海医疗器械厂）。
1.2药材
川芎药材购自济南建联中药店，经山东省中医药研究所生药室鉴定为伞型科植物川芎Ligus-ticumChuanxiongHoort.的干燥根茎。
1.3试剂
所用试剂均匀为分析纯；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
1.4动物
昆明种小鼠，♀♂共用，体重18~22g、24~26g，由山东中医药大学动物实验中心提供。
2方法和结果
2.1样品制备
2.1.1川芎细粉将川芎粉碎成全部通过六号筛的粉末。
2.1.2川芎微粉将川芎超微粉碎成中心粒径10?m以下不少于95%的微粉。
2.1.3川芎水提物取川芎药材粉碎成粗粉。称取50g，加水煎煮两次，第1次10倍量水2h，第2次8倍量水1h，滤过，合并滤液，减压浓缩至稠膏，真空干燥，得干膏18.1g。
2.1.4川芎醇提物取川芎药材粉碎成粗粉，称取50g，加80%乙醇提取2次，每次8倍量，每次2h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，真空干燥，得干膏12.0g。
2.1.5川芎双提物取川芎药材粉碎成粗粉，称取50g，加水提取挥发油至尽，收集挥发油，提取液滤过，药渣加水煎煮1h，滤过，合并滤液，减压浓缩成稠膏，真空干燥，得干膏20.2g。
2.2溶出液制备
调节溶出仪水浴为37℃恒温，精密量取1000mL人工胃液置溶出仪的烧杯中，于恒温水浴中保温，搅拌转速设为100r·min-1。取粉碎样品，分别精密称定重量（细粉、超微粉称取约3g，提取物称取相当于原药材3g的干膏量）每组3份，置测定仪的烧杯中，人工胃液接触到样品时开始计时，1h后，取出液体，2000r·min-1离心20min。取上清液经滤膜过滤，即得供试溶出液。
2.3阿魏酸含量测定
2.3.1薄层层析及扫描条件取硅胶G，加0.2%的CMC-Na，自动铺板器铺成10cm×20cm×0.03cm的薄层板，105℃活化30min后置干燥器中保存，冷却后备用。正已烷-氯仿-冰醋酸（8：8：1）展开，展距8cm，双波长反射式锯齿扫描，λs=328nm，λR=370nm。
2.3.2标准曲线的绘制精密称取阿魏酸对照品约1mg，以甲醇溶解，转移至2mL量瓶中，加甲醇并稀释至刻度摇匀，作为对照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5?L点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开，取出、晾干，置紫外光下365nm处检视，定位，测定，结果表明阿魏酸在0.5~2.5?g之间上样量与斑点峰面积积分值呈线形关系，回归方程为Y=1124.68X+273.21，r=0.9992。
2.3.3样品测定精密吸取溶出液50mL，乙醚提取3次，每次50mL合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解，定容于2mL量瓶中，作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10?L，对照品溶液1?L和5?L点于同一硅胶G薄层板上，依法测定，测定结果见表1。（川芎原药材中阿魏酸的含量为0.0314%）。
2.4川芎不同粉碎度的镇痛作用
2.4.1对0.6%醋酸扭体法的镇痛作用比较♂小鼠60只，体重24~26g，按体重随机分为3组，分别给于各药物组灌胃，1次/日，连续3日，对照组给等体积的蒸馏水灌胃，末次给药后30min，逐只腹腔注射0.6%醋酸（0.1mL/10g鼠重），观察注射后出现*次扭体反应的时间及15min内的扭体次数，并进行组间统计学处理，结果见表2。
2.4.2对小鼠热板法镇痛作用比较雌性小鼠60只，体重18~20g，实验前预筛痛阈，以痛阈值大于5s，小于30s者为合格，而后随机分为3组，分别给药同2.4.1项，按热板法〔2〕测定其痛阈值，进行组间t检验。
3小结和讨论
实验结果表明，川芎的不同粉碎及提取工艺中，超微粉及醇提物中有效成分阿魏酸的溶出量较高，镇痛作用也较强。据文献报道，川芎挥发油中主要成分藁本内酯有拮抗子宫收缩的作用〔3〕。有机酸类成分阿魏酸有抗炎和镇痛作用〔4〕，但受热易破坏，在川芎水提和双提工艺中，因为高温和长时间的加热，阿魏酸大量损失。川芎超微粉因药材细胞已破壁，更有利于有效成分的溶出，故川芎超微粉与醇提物阿魏酸的溶出量较多，镇痛作用也较强。另外，其生物碱川芎嗪可较多的透过血脑屏障，是药效成分之一〔5〕。但此成分极易受热破坏，经过加热提取及浓缩过程已损失殆尽〔6〕。因没有购到川芎嗪的对照品，此部分工作尚需补充。
通过本次实验可以看出，川芎醇提取中阿魏酸的溶出量仅次于超微粉，而镇痛实验也证实醇提法强于水提法及双提法，仅次于超微粉及细粉。综合考虑，我们认为在剂型允许原药材粉入药的情况下，如散剂、蜜丸等，川芎的入药形式以超微粉为好，但若为液体制剂或需减少服用剂量的剂型，如滴丸等，川芎入药形式还是以醇提物为好。
超微细粉化技术近年来应用于中药的研究报道逐渐增多，它是利用振动对物料进行压缩式粉碎，可将以传统粉碎工艺得到的原生药粉末的粒度从150~200目（75μm以下），提高到中心粒径5~10μm以下，以达到细胞破壁的目的。这种新技术不仅可以全成分保留活性物质，而且可以使药材中的有效成分直接暴露出来，从而使药物吸收更加迅速、*〔7〕。中药有效成分的溶出与药物在体内的生物利用度之间存在着一定的相关性〔8,9〕。综合本研究实验结果可以看出，川芎超细微粉化入药或进行方剂的制剂工艺研究，是相对合理科学的。本研究亦为中药的超细微粉化研究提供了一个新的思路。
参考文献：
[1]中华人民共和国药典[S]北京：化学工业出版社.一部，2000：30.
[2]李仪奎.中国药理实验方法学[M].上海：上海科技出版社.1991：102.
[3]尾崎幸弘.川芎的药理和药效[J].国外医药·植物药分册.1994，9（4）：164
[4]刘鹰翔.四甲基呲嗪和阿魏酸的抗炎作用[J].国外医药·植物药分册.1993，8（2）：85.
[5]肖静.川芎嗪药理研究的新进展[J].华西药学杂志，1993，8（3）：170.
[6]北京制药工业研究所.川芎有效成分研究：川节嗪的提取，分离和结构鉴定[J].中华医学杂志.1977，57（8）：420-421.
[7]徐莲英，陶建生.中药制剂发展的回顾[J].中成药.2000，22（1）：6.
[8]刘产明，杨洪元.不同粉碎度三七体外溶出试验[J].中成药.1998，20（2）：17.
[9]杜晓敏，刘璐，何煜.生药材超细微粉制剂的药效学研究[J].中草药.1999，30（9）：680.