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南通飞宇生物科技有限公司
主营产品： 植物单体提取物,标准品,ELISA试剂盒,生物试剂,细胞生物学产品 |
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2012-11-8 阅读(4086)
槲皮素含量的液相色谱测定方法
1.目的：
建立槲皮素含量测定的HPLC标准检验操作规程。
2.范围：
适用于槲皮素的含量检测。
3.对照品：
槲皮素（Quercetin，Sigma 公司）
4.试剂：
4.1甲醇（色谱纯）
4.2甲醇（分析纯）
4.3磷酸（分析纯）
4.4 水（超纯水）
5.仪器：
5.1液相色谱仪：Waters 2695输液泵；Waters 2487紫外检测器；Empower色谱
数据工作系统
5.2 分析天平：感量0.00001g
5.3超声波清洗仪：功率250W，频率40KHz
5.4 玻璃流动相过滤器（0.45μm）
5.5 针式微孔滤膜（0.45μm）
5.6 玻璃量器：量筒（100ml）、容量瓶（25、50ml）等。
6.溶液的制备：
6.1对照品溶液的制备：
精密称取槲皮素对照品约10.0mg 于50ml 的容量瓶中，加入甲醇约40ml,超声溶解后，放置至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
6.2样品溶液的制备：
精密称取样品约10mg于50ml的容量瓶中，加入甲醇约40ml,超声溶解30分钟后，
放置至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
7.色谱条件：
色谱柱：Agilent SB-C18 （150mm×4.6 mm ,5um）
检测波长:360nm
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
流动相:甲醇：0.2%磷酸水溶液（55：45,v/v）
灵敏度:2.000AFUS
系统适应性：理论塔板数以槲皮素峰计不得低于3000。
8.样品测定：
在上述色谱条件下，等仪器稳定基线平稳后，精密吸取对照品溶液和样品溶液各
10.0ul,分别进样测定，槲皮素的保留时间约为10分钟，用面积外标法计算样品含量。
9.含量计算
% 100
0 0 1
1 0 1 ´
´ ´
´ ´ ´
=
A V W
A W V K 含量（ ）
其中 A1：样品溶液中槲皮素的峰面积
A0：对照品溶液中槲皮素的峰面积
W1：样品的称样量mg
W0：对照品的称样量mg
V1：样品的体积mL
V0：对照品的体积mL
K： 对照品的纯度
样品含量结果取两个平行样品含量的平均值。https://www.zyzhan.com/st31771/Index
