4  测试方法

4.1  方法提要

   本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。

4.2  所用的仪器、设备和培养基

    a）浮游菌采样器；

    b）真空抽气泵；

    c）培养皿；

    d）培养基；

    e）恒温培养箱。

4.3  浮游菌采样器

    浮游菌采样器宜采用撞击法机理的采样器，一般采用狭缝式采样器或离心式采样器。

4.3.1  采用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。

4.3.2  狭缝式采样器的原理

   狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气，通过采样器的缝隙式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落，予以计数。

4.3.3  离心式采样器的原理

   离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到的固形培养条上，经培养后形成菌落，予以计数。

4.3.4  狭缝式采样器的使用要点

    应严格按仪器说明书的要求进行操作。

4.3.4.1  校验

   采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。校验的项目有：定时器、转盘转速、流量计。

4.3.2  每次测试前应按说明书上的规定，先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计及定时器。

4.3.4.3 空气采样量根据需要选定。已知采样器的流量（L/min），设定采样时间（min），两者相乘即采样量（L）。

4.3.4.4  注意事项

4.3.4.4.1  采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。

4.3.4.4.2  采样管严禁渗漏，内壁应光滑。

4.3.4.4.3  采样管的长度应根据测点的高度定，尽量减少弯曲。

4.4  真空抽气泵

4.4.1  真空抽气泵的排气量应与采样器匹配。

4.4.2   宜采用无油真空抽气泵，必要时可在非气口安装气体过滤器。

4.4.3  真空抽气泵安装的位置必须适当，一般装在采样器下面。

4.5  培养皿

4.5.1  狭缝式采样器一般采用? 150mm×15mm、? 90mm×15mm、?65mm×15mm三种规格的硼硅酸玻璃培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。

4.5.2  离心式采样器采用的固形培养条。

4.6  培养基

    普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。

4.7  恒温培养箱

    必须定期对培养箱的温度计进行检定。

4.8  测试步骤

4.8.1  测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。

4.8.1.1  采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。

4.8.1.2  用消毒剂擦净培养皿的外表面。

4.8.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

4.8.1.4 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。

4.8.1.5  采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

4.8.2  狭缝式采样器的采样程序

4.8.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。

4.8.2.2  关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。

4.8.2.3  置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。

4.8.3  培养

4.8.3.1  全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

4.8.3.2  在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

4.8.3.3  每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

4.8.4  菌落计数

4.8.4.1  用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.8.4.2  若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

4.8.5  注意事项

4.8.5.1  使用前仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。

4.8.5.2  采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。

4.8.5.3  对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4.8.5.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。