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纤维素含量测定样品的前处理-齐一生物
2018-10-22 阅读(1458)
纤维素（CLL）含量测定原理：
纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物。β－糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
纤维素含量样品的前处理：
1、 细胞壁的提取：取约 0.3g 样本，加入 1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴 酮各洗一遍（涡旋振荡 2min 左右，4000g 25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入 1mL 试剂一（去除淀粉）浸泡 15 小时，4000g 25℃离心 10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2、 纤维素的提取：称取烘干的 CWM 约 5mg，加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至 EP 管中，用蒸馏水定容至 0.5mL，置于冰水浴中，缓慢加入 0.75mL 浓硫酸，混匀，冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min，取上清液，用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
纤维素含量测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制：在试剂二中加入 4mL 试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试剂 4℃保存一周；4、
齐一生物主要经营进口原装Elisa试剂盒,自产品牌QIYBIO试剂盒。并提供免疫分析相关试剂及检测试剂盒。
