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人:
曹胜华
址:
宝山区华灵路1225弄350号
编:
200442
铺:
https://www.zyzhan.com/st63909/
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流式抗体(荧光抗体)细胞染色步骤

2015-12-24  阅读(18103)

  • 染色缓冲液 (BSA)的配制: PBS含有1% FBS和0.09% NaN3,置于冰上或4度冰箱备用。

     

     

  • 准备单细胞悬液:淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。
  • 用 冰染色缓冲液 洗细胞2次,离心细胞,用冰染色缓冲液重悬细胞,使终浓度为2×10 7 细胞/ml。
  • 各取50ul(10 6 细胞)细胞悬液到2个圆底的Ep管中。
  • 根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量,另外1个加入同型对照抗体,冰上避光孵育20分钟(建议每5分钟轻轻混匀,以免细胞沉积)。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。
  • 用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体,300×g离心5分钟,每次离心后小心吸取上清。
  • 用适量染色缓冲液(如500ul)重悬细胞。
  •  流式细胞仪分析染色结果(不超过4小时)。如果暂时无法检测,也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后,避光储存在4度。固定后的细胞可以保存zui多一个星期。

 



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