压力蒸汽灭菌器的容器中存在着一定的压力和温度，属于特种设备，如果使用操作不当，容易造成人身伤害事故，所以使用时应注意。
1、经常检查灭菌器电源线的接地是否良好，以保证人身安全。
2、灭菌器应置于通风干燥、无易燃易爆物品的室内使用。
3、安全阀、排气阀出厂时已校定位置，阀上的铅封及螺丝不得任意拆启。
4、对堆放物品不得超过总容积的4/5位置。
5、密封圈切勿附油，以免损坏胶质而造成漏气。
6、严禁对与蒸汽介质接触引起爆炸或突然升压性的化学物品灭菌。
7、堆放灭菌器物品时，严禁堵塞安全阀、排气阀的出气孔，必须留出空位确保空气畅通，否则安全阀和排气阀因出气孔堵塞不能工作，造成事故。
8、灭菌液体时，应将液体灌装在耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花纱塞。切勿使用打孔的橡胶或软木塞；在灭菌结束后，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零后方可排放余气。
9、对不同类型、不同灭菌要求的物品，如敷料和液体等，切勿放在一起灭菌，以免造成损失。
10、压力表使用日久后，压力指示不正确或不能回复零位，应及时予以更换，平时应定期送有资质的单位进行校验，若不正常，应换上新表。
11、安全阀应定期检查可靠性，如压力表指针已超过0.165Mpa时安全阀不起跳则必须立即停止使用并更换合格的安全阀。
12、消毒器使用时应消毒室内，有专人操作，不得在公共场所使用。
13、插座必须装有连接地线应确保电源插头插入牢固。切勿损坏电线或使用非的电源线。电源线连接上的弹簧片为保护接地，应保持接触良好。
14、安全阀和压力表使用期限满一年应送法定计量检测部门鉴定。
15、消毒器物品之间留有间隙，顺序地堆放在消毒器内的筛板上，这样有利于蒸汽的穿透，可提高灭菌效果。
16、加热时注意把电源线插头插紧，使插头接地铜片与护罩紧密接触，保证使用安全。加热开始时打开排气阀，消毒器内冷空气会随着加热由阀孔溢出。当阀孔有急的蒸汽冲出时，将排气阀关闭。消毒器压力达到所需范围时，适当调整或通断热源，使之维持恒压，并开始计算消毒时间，按不同的物品和包装保持所需消毒的时间。
17、敷料、器械和器皿等消毒后需要干燥时，可在消毒终了时将消毒器内的蒸汽由排气阀排出，当压力表指针回复到零位后稍待1-2分钟，将盖打开，并继续加热几分钟，这样能使物品达到干燥目的。
18、溶液培养基等若在消毒后立即放汽，会因压力突然下降引起瓶子爆破或消毒器内装溶液溢出等严重事故。所以在消毒终后不应立即放汽，而应停止加热使其自然冷却20-30分钟，使内在压力冷却而下降至零位（压力表指针回到零位）后数分钟，将排气阀打开，然后略微打开盖子（开一条缝），人离开消毒室，待其自然冷却到一定程度再取出。