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皮肤细胞

参考价面议
具体成交价以合同协议为准
  • 公司名称上海抚生实业有限公司
  • 品       牌
  • 型       号
  • 所  在  地上海市
  • 厂商性质代理商
  • 更新时间2018/5/14 9:00:00
  • 访问次数4466
产品标签:

皮肤细胞

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 上海抚生实业有限公司

  Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd. 

成立于2007年,经过数年的努力已迅速成为集科研和生产为一体的专业化生物工程公司。特别是ELISA研发,代测,技术服务这一产品已使上海抚生成为中国公司。

 

 

公司产品涵盖ELISA研发、细胞培养,各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、上海抚生还代理了美国药典标准品,中检所标准品,sigma,ScienCell,ATCC,wak0,omega,Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类公司的产品。

上海抚生将进一步加强人才经营、产品经营,不断提升企业的核心竟争力,实现具有高科技产业体系、知识化创业团队的化的公司,服务于生命科学领域,迎接世界经济一体化所带来的机遇与挑战。
 

ELISA试剂盒
公司主营各种系列细胞株、不同种属细胞株,细胞株库存种类齐全,完全可满足广大客户的细胞研究实验需求,公司细胞株活性强、生长特性正常,实验效果好,良好的售后服务,长期得到国内外顾客的厚爱,我们的皮肤细胞,价格公道、实惠。
皮肤细胞 产品信息

皮肤细胞复苏步骤注意事项:

      【材料】
1.  常规细胞培养仪器设备 恒温水浴振荡器。
2.  培养液(DMEM)胎牛血清(CBS)二甲基亚砜(DMSO)
【操作程序】
1.  细胞实验室进行常规消毒,紫外照射40min以上。
2.  培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱370C预热20min,备用。
3.  二甲基亚砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min,备用。
4.  从液氮保存罐中取出冻存管,立即放入400C水浴中,快速摇晃,直至冻存液完全融化。
5.  将细胞悬液移入15ml离心管,缓慢加入4ml培养液,离心(1000r/min,5min)。
6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞,调整细胞浓度,方培养箱中培养。
7.  记录复苏日期。
皮肤细胞 常见问题及解决方案
    细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以离心去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪技术指导,直到问题解决。

   客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项,确保细胞的培养条件*,如果由于培养条件不*导  致细胞出现问题,责任由客户自行承担。由于运输的情况,所以个别细胞会出现不稳定,客户收到细胞后务必*时间和我们,告知细胞具体情况,以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通,不胜感谢!

【注意事项】
1.  取细胞的过程中注意带好防冻手套,护目镜。此项尤为重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。
2.  冻存液的问题:冻存液的配置已是常识,在这里不作详述,但二甲基亚砜(DMSO)对细胞不是完全无毒副作用,在常温下,二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大,因此,必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢,会造成细胞的损伤,二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。
3.  离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高,注意加入少量培养液可稀释其浓度,以减少对细胞的损伤。
4.  离心问题:目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养,第二天换液。因为离心的目的是两个,去除 DMSO,去除死细胞,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大, 死亡。此外在操作过程中容易污染,所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO),DMSO对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液 体前倒净,且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏,结果无有异常。
5.  细胞贴壁少的问题:教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15m培养液,而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附
6.  复苏细胞分装的问题:试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。
7.  加培养基的量放入问题:这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度,从如果你加培养基的太少,那么DMSO的浓度就会比较大,就会影响 细胞生长,从以前的资料来看,DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响,还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是 10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。

 

一、原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞zui易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大
目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
二、操作步骤
(一)冻存
1、消化细胞(同实验二),将细胞悬液收集至离心管中。
2、1000rpm离心10分钟,弃上清液。
3、沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/ml左右。
4、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。
5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。
6、贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
7、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。
注意:操作时应小心,以免液氮冻伤。液氮定期检查,随时补充,不能挥发干净,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
(二)复苏
1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏,内装2/3杯37℃的温水。
2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。
3、打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。
4、1000rpm离心10分钟,弃去上清液。
5、沉淀加10ml培养液,吹打均匀,再离心10分钟,弃上清液。
6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中,37℃培养,第二天观察生长情况。
三、     
试剂和器材

器材:液氮罐、冻存管(塑料螺口冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等
试剂:0.25%胰酶、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液)
附:冻存液配制:
培养基加入甘油或DSMO,使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4℃下保存。

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