踏上纯化之路，往往就要面对层析填料的选择：填料类型、基架、配基、粒径的不同….而在百林科层析填料家族中，有这么一类亲和填料：团队成员虽少，利用好可以展现强大作用，它们就是预活化填料，其可以根据项目类型选择抗体、抗原、酶、小核酸或者多肽作为亲和配基，纯化能与之结合的相应的配体。
面对不同类型预活化填料的选择，往往让大家迷茫，今天重点跟纯化小伙伴们聊一聊，如何选择预活化填料？
百林科不同类型预活化填料基本介绍
01 CNBr activated Chromstar 4FF
CNBr activated Chromstar 4FF预活化亲和填料，通过生物分子之间的特异性的相互作用进行分离纯化，该填料常用于偶联含氨基的高分子量配基。CNBr activated Chromstar 4FF 可实现含氨基蛋白配基多点连接，从而减少配基脱落，增加层析介质稳定性。
02 NHS activated Chromstar 4FF
NHS activated Chromstar 4FF预活化亲和填料，通过生物分子之间的特异性的相互作用进行分离纯化。该填料常用于偶联小分子蛋白或多肽，拥有稳定性强的性能：与游离氨基快速结合，含有间隔臂，共价键化学稳定性强；耐受较高的pH。
03 Epoxy-activated Chromstar 6B
Epoxy-activated Chromstar 6B 是一款琼脂糖基架的预活化亲和填料，可以通过配基上的羟基、氨基或巯基等基团，进行偶联，以此形成特定的亲和层析介质，其拥有长亲水间隔臂，特别适用偶联小分子配基。
图1：百林科不同规格填料
关于 NHS 和 CNBr 的选择？
实际应用中，经常碰到NHS 和 CNBr 如何选择的问题，两款预活化填料最主要的区别是 ：
01 NHS 预活化填料的反应位点与填料基架之间有间隔臂，而 CNBr 则没有。当需要结合的样品是蛋白质等生物大分子时，建议选择NHS预活化填料，这样可以降低由于空间位阻带来的不利影响。
02 NHS能耐受较高的pH值，在pH 13时仍然非常稳定，而NHS共价键化学稳定性比CNBr高， 一般情况下，NHS 可以替代 CNBr 的应用。
偶联原理和注意事项
配基是通过其功能基团的反应偶联到基质上，因此偶联方法的选择取决于配基的特性。NHS或者CNBr填料通过配基的伯胺基团进行偶联， Epoxy利用羟基、氨基或者巯基通过长亲水间隔臂进行偶联，一般偶联糖类物质居多。
在偶联过程中，由于偶联方式是针对某一个功能基团进行的，因此在准备配基的溶液时，需要注意，选择的缓冲液不能含有类似的功能基团离子，例如，在使用NHS填料时，缓冲液不能是Tris这类带氨基基团的缓冲液，否则缓冲液中大量的氨基基团会偶联至填料上。偶联时尽量选择高纯度的配基，以减少非特异性结合。不同配基偶联条件不同，具体请参考说明书中的内容。
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