为了进一步降本增效，越来越多的药企使用N-1代次的种子在N罐中提前培养的工艺。本文介绍了用百林科的一次性生物工艺技术进行小体积培养的工艺设定，并与传统梯次培养相比较的优势，提供了灵活性更高的工艺方案选择。
 

　　百林科CytoLinX WB 一次性波浪式生物反应器和CytoLinX BR 50-2000L系列一次性罐体式生物反应器，均可实现无级放大生产，为优化工艺提供了强大的一次性设备解决方案。
 

　　设备优点
 

CytoLinX WB 一次性波浪式生物反应器
 

　　CytoLinX WB 一次性波浪式生物反应器特点包括：
 

　　► 培养体积从0.1 L 到100 L
 

　　► 软件界面友好且稳定，符合 21 CFR Part 11 要求
 

　　► 可选的 pH, DO 模块
 

　　► 使用气体质量流量计 (MFC) 对气体进行精准计量
 

　　► 耗材款式多样，包括基础款，pH & DO 电极款，灌流款
 

　　► 涵盖针对细胞治疗应用的耗材设计
 

CytoLinX BR 一次性罐体式生物反应器
 

　　CytoLinX BR 一次性罐体式生物反应器特点包括：
 

　　► 反应器的培养体积从50 L到2000 L
 

　　► 界面用户友好，可实现 “即插即用” 的 “1 控多” 功能
 

　　► 采用稳定的 DCS 控制系统，符合 ISA 88 控制标准
 

　　► 软件设计符合 21 CFR Part 11
 

　　► 耗材底通大泡，中泡，微泡可选，符合多种工艺需求
 

　　本应用使用CytoLinX BR 一次性罐体式生物反应器和CytoLinX WB 一次性波浪式生物反应器进行优化抗体生产的Fed-Batch工艺中的效果。本次实验分别使用CHO-K1,CHO-DG44细胞，通过在CytoLinX WB 一次性波浪式生物反应器进行细胞扩增，随后转接到200L CytoLinX BR 一次性罐体式生物反应器中培养。两次实验的抗体产量均达到预期。
 

　　下图为CytoLinX BR一次性罐体式生物反应器在细胞培养过程中表现出很好的工艺参数的控制效果。
 

　　▲ 图1 CytoLinx BR-200 14天细胞培养结果图(图中曲线为重量、DO、温度、pH)
 

　　实验方法
 

　　本次实验分别使用CHO-DG44，CHO-K1细胞，细胞根据标准方法从冻存管中复苏，然后每三到四天在摇瓶中进行传代扩增。待细胞量足够后，将细胞接入CytoLinX WB 及 CytoLinX BR-200生物反应器继续培养。
 

实验一：CHO-DG44 细胞扩增、N-1扩增阶段及流加培养阶段操作参数和条件
 

实验一结果: 细胞培养生长曲线和生化数据如图 2、图 3 所示。
 

▲ 图 2 CHO DG44 细胞生长密度、活率曲线图
 

▲图 3 CHO-DG44细胞生化数据乳酸、pCO2曲线图
 

　　实验二：CHO-K1 细胞扩增、N-1扩增阶段及流加培养阶段操作参数和条件
 

实验二结果：细胞培养生长曲线和生化数据如图4、图5所示。
 

▲图 4 CHO-K1细胞生长密度、活率曲线图
 

▲ 图 5 CHO-K1细胞生化数据乳酸、pCO2曲线图
 

　　CytoLinX-200起始培养体积为140 L 。经过每天补料，在收获时的CytoLinX-200最终体积约为175 L。如图2、图4所示，两种生物反应器培养的细胞显示出非常相似的生长曲线，具有三个截然不同的生长阶段：在刚开始72小时内为为初始的快速生长阶段；然后是一个较慢的生长阶段；而后是平台期为细胞活力不断降低的死亡阶段，直到收获。细胞在具有93.62%到93.1%的活力时被收获。两次培养均达到与预期相匹配的效果。
 

　　如图3、图5所示 两次实验pCO2有相同的上升趋势。培养过程，二氧化碳分力(pCO2)曲线如图所示。在培养的早期阶段，细胞产生乳糖，降低pCO2以维持pH，相反随着乳糖浓度的降低和补料操作增加盐和碱浓度，二氧化碳分压将增加。
 

　　结论
 

　　结果表明，CytoLinX BR 50-2000一次性波浪式生物反应器既可以用于种子培养，也可以用于规模化生产。两批次反应器培养细胞结果表现出与卫星罐相似的细胞密度和活力、代谢物浓度和抗体产率。在连续两次实验中, CytoLinX BR均表现出相当稳定的工艺控制效果与高效的蛋白表达结果，符合客户生产预期。CytoLinX BR系列生物反应器，在细胞培养反面表现出很好的工艺参数稳定控制的效果，为重组蛋白及抗体放大及生产提供了一个可靠的、高效的解决方案。
 

 

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