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纯化小技巧 | 超大分子纯化效率翻十倍?泰酷辣!

阅读:361      发布时间:2023-5-18
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  超大分子的分子量通常超过数百KD,比如病毒、VLP、病毒载体、IgM 等。

图1 常见分子大小示意图(图片来自网络)

 
  无论在科研还是制药行业,获得足够量、高纯度的样品是必要操作。以可溶性样品为例,常用分离纯化手段包括离心、膜过滤、层析等。其中,分辨率最高、分离原理丰富的当属层析技术。根据层析原理的不同,分为凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析、多模式层析。根据目的分子和杂质的最大区别点,选择相应的层析填料,可以事半功倍。
 
  以293T细胞培养为例,绝大部分宿主蛋白和宿主核酸等杂质的分子量在100KD以下,因此,与病毒有数倍的分子量差异,可以使用凝胶过滤层析填料(例如百林科的Chromstar 4FF)进行分离:病毒在外水出峰,杂质在内水出峰,从而实现分离。

图2 Chromstar 4FF纯化流感病毒图谱

 
样品:流感病毒料液
 
柱体积:150ml
 
上样量:10ml
 
流速:2ml/min
 
  由于凝胶过滤层析填料的上样量通常是柱体积的5%~15%。为了增加处理量,通常会装填比较高的柱床高度,以获得大的柱床体积。

 
上面的方法很好,
 
 
但是,这里要告诉你一个更好的方案

MaXtar
 
  百林科的MaXtar COLL系列多模式层析填料,专为超大分子设计,包括MaXtar COLL 700、MaXtar COLL 400两种;分别适用于分子量超过700KD和400KD的超大分子。

图3:MaXtar COLL 400纯化VLP图谱

 
样品:VLP(单体60kDa,120聚体)
 
柱体积:30ml
 
上样量:300ml
 
流速:7ml/min
 
  关键在于,COLL系列多模式层析填料的上样量可以扩大到柱体积的5~10倍!而流速可以提高3~5倍——简直泰酷辣!需要注意的是,为更大程度发挥COLL系列内部的多种配基吸杂效果,建议在缓冲液中添加100~150mM NaCl;在CIP清洗环节,建议使用1M NaOH, 30%异丙醇。
 
#互动话题:
 
在过往的分离纯化经验中,让你最头疼的问题是什么?
 
  评论区留言讨论,我们会根据大家关心的问题调整下期的主题,更有精美礼品送给点赞最高的评论!欢迎大家畅所欲言!
 
  想了解更多层析填料的可选方案?欢迎扫码下载百林科《层析填料选择指南》,大量层析产品均可申请试用哦!

 

 

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