ADCC简介

抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC，antibody dependent cellular cytotoxicity）是指抗体的Fab段结合病毒感染的细胞或肿瘤细胞的抗原表位，其Fc段与杀伤细胞（NK细胞、巨噬细胞等）表面的FcR结合，介导杀伤细胞直接杀伤靶细胞。

活细胞动力学成像

ADCC的过程

IgG抗体可介导多种杀伤细胞发挥ADCC作用，其中NK细胞是发挥ADCC作用的主要细胞。在抗体介导的ADCC作用的发生过程中，抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，NK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。

ADCC的研究方法

活细胞动力学成像

是时候介绍活细胞动力学成像法进行ADCC实验了！

01

成像法原理

通过对靶细胞进行荧光标记，常用染料为活细胞染料Calcein AM。加入效应细胞和抗体后，一旦发生ADCC作用，靶细胞会释放出Calcein AM染料，细胞内荧光变弱，后续利用BioTek成像实时观察靶细胞荧光图片，并进行量化分析。

区分靶细胞和效应细胞

具体设置

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软件自动分析

Gen5软件可以自动计算每个样品孔所有数据点的绿色荧光细胞个数，继而转化成计算曲线下面积（AUC）。利用以下公式计算ADCC作用。

自动分析曲线下面积

活细胞动力学成像

03

已经有多篇文献报道成像法用于ADCC检测，让我们一起来看看吧。

文献1

活细胞动力学成像

眼见为实

活细胞动力学成像

活细胞动力学成像

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Time 0为初始图片，Time 4为四小时后图片。

其中NK-92_158V细胞为CD16a表达的效应细胞，B淋巴细胞为靶细胞。

动力学VS终点法

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在孵育1小时的样品组中，动力学法仍然可以识别出ADCC效应，而终点法则很难识别出来。

在孵育4小时的样品组中，两种方法的EC50相差无几。利用动力学法，可以保证灵敏度的同时，缩短实验时间。

文献2

活细胞动力学成像

多重数据

活细胞动力学成像

活细胞动力学成像

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NK细胞介导K562细胞溶解

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ADCC应用场景

举个例子用于筛选单抗、。

已知CD20蛋白为B细胞表面抗原，淋巴瘤、白血病等疾病治疗的目标靶点。HER2蛋白广泛表达于乳腺癌及胃/食管癌。

下图蓝色线为用于CD20表达BJAB细胞（淋巴瘤细胞）；红色线为用于HER2表达的SKBR3细胞（乳腺癌细胞）。两种单抗均展示出ADCC作用。

活细胞动力学成像

活细胞动力学成像的方法不仅可以应用在ADCC实验中，也适用于检测CTL（T细胞杀伤实验）、CDC（补体依赖的细胞毒性作用）和NK细胞杀伤实验等。

引用文献：

1. Kamen L, Thakurta T, Myneni S, Zheng K, Chung S. Development of a kinetic antibody-dependent cellular cytotoxicity assay. J Immunol Methods. 2019;468:49‐54. doi:10.1016/j.jim.2019.02.006

2. Fassy J, Tsalkitzi K, Salavagione E, Hamouda-Tekaya N, Braud VM. A real-time digital bio-imaging system to quantify cellular cytotoxicity as an alternative to the standard chromium-51 release assay. Immunology. 2017;150(4):489‐494. doi:10.1111/imm.12702

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