玻璃罐是实验室常用的悬浮培养设备之一，基于贴壁细胞，球状微载体目前已成功实现从2D培养进入3D培养的工艺，满足让细胞贴附在载体上，使载体以悬浮培养的形式进行细胞扩增。
但屏幕前的你是不是会遇到这样的问题，用微载体在既有玻璃罐中进行细胞培养，出现了如:微载体分层，细胞贴附生长不均匀，细胞密度增殖效果差等各类问题？
如果这些问题还在困扰你，今天我们带来的微载体X玻璃罐的培养细胞四大秘诀，不仅能解决你的困扰，还能帮你成为细分领域的细胞培养小能手！
下划看重点↓↓↓
秘诀一：玻璃罐构造的诀窍
传统的玻璃罐主要以培养悬浮细胞为主，它们未必可以直接拿来使用微载体的培养工艺。不合适的罐体及构造极有可能导致微载体在搅拌悬浮时分层。
就有可能会遭遇类似尴尬：转速小了，微载体不能均匀的全部分散在培养基中，转速大了，细胞又不能很好的贴附和生长？
那是因为罐体尺寸和桨叶大小需要匹配并满足不同培养体积和载体浓度，帮助微载体能够在合适的转速下均匀分散，不出现分层的现象。例如罐体底部直径偏大，搅拌浆较小，安装位置不合适或者单桨叶的玻璃罐，都可能会有微载体分布不均匀的风险，所以选择玻璃罐需要先尝试满载下高浓度载体填充的搅拌测试，并观察微载体的分布状态。
秘诀二：避免微载体粘壁的诀窍
当玻璃罐出现微载体粘壁的情况，会导致微载体的损失，从而降低细胞生长面积。
可能造成如上情况的原因：
1 培养微载体的玻璃罐在使用前未进行硅化，目前市面上已有无毒的硅化剂可供选择，且已有实验证明其对细胞生长并无影响。
2 除了没有硅化，通气量的设置也会造成一定影响。过大的通气量容易使微载体随气泡上浮，并且液体上表面形成大量气泡，将微载体聚集在气泡表面，桨叶以及罐壁上。按2L培养体积的玻璃罐举例，通气量最好在0.01~0.03lpm之间。
秘诀三：微载体进行平衡时的诀窍
灭菌后，微载体需将上清的PBS去除，而后加入新鲜培养基置换过夜。再去除置换培养基，重新加入新的培养基在玻璃罐内平衡过夜，避免稀释培养基和血清浓度，导致贴壁效果不佳。
平衡过程中的PH需要严格把控在7.0~7.4，以防影响后期细胞贴附的效果。将CO2通气设置级联PH值，保证整个平衡过程不会出现PH值的大幅度变化。平衡过程中建议温度设定比目标值低3~4°C。
秘诀四：搅拌速率对贴壁影响的诀窍
玻璃罐里用微载体培养细胞，搅拌速率该如何设置才更合理？
• 速率太大，不利于细胞贴附，并且高剪切力也会使细胞受到一定损伤；
• 速率太小，部分载体容易沉降，也会导致贴附不均匀，甚至出现部分空球的问题。
细胞不同阶段搅拌速率的设置是很有讲究的，比如平衡阶段，需要把转速调到刚好使载体均匀分布在培养基中的最低转速；而在刚完成接种细胞，可以通过间歇式搅拌，高转速使细胞与微载体混合均匀，低转速或者停止搅拌可以给予细胞贴附更有利的环境；或者连续式搅拌，以最低的搅拌转速完成贴壁过程。
一般Vero细胞在接种后4小时左右即可达到95%以上的贴附率，之后可再设置恒定转速进行接下来的培养；每天要定期取样监测细胞密度和活率，以及在显微镜下观察细胞贴附及铺展的状态，并且观察微载体在罐体内是否有分层、结团或者沉淀的现象来判定是否需要调整转速。
当然，成功的培养还和很多其他因素有关，如微载体的粒径分布，也是细胞能否均匀贴壁至关重要的因素之一。
左图：LePhinix®️ EZG台式反应器
右图：LeProlif®️ Sphere 球状微载体
乐纯生物LeProlif®️ Sphere 球状微载体具有优异的抗剪切能力和出色的粒径分布，结合乐纯生物LePhinix®️ EZG台式反应器，先进智能的玻璃罐，一起助力玻璃罐里微载体培养细胞的工艺，更简单，更高效！
上图为LePhinix®️ EZG 台式反应器中，10L培养体积，Vero细胞在LeProlif®️ Sphere球状微载体上的生长情况。
数据图文显示，利用LePhinix®️ EZG的智能搅拌设置，可使Vero细胞在接种后4h就达到贴壁率95%以上；并且Vero 细胞在LeProlif®️ Sphere球状微载体上可在3~4天达到汇合阶段，生长周期较短，并可长时间维持高密度及高活性，有利于接毒和细胞产物的收获。
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