引言
对于贴壁依赖性细胞，微载体可为其繁殖和生长提供较大的表面积。由于特定的细胞类型对附着和铺展有其特有的要求，因此应根据经验选择最佳的微载体。使用多种微载体类型进行小规模研究极为实用且必要，可以确定适用于该应用的最佳微载体，并能帮助在开发过程中更大程度节省成本。
Vero细胞是一种贴壁依赖性细胞，广泛应用于病毒疫苗生产平台。今天我们将为大家以一则应用分享：LeProlif®️ Sphere球状微载体培养Vero细胞生产疫苗的巨大潜力。
研究过程：在2L和10L的LePhinix®️ EZG台式生物反应器中无菌接入LeProlif®️ Sphere球状微载体培养Vero细胞，通过反应器控制工艺流程，采用批次培养模式培养细胞，并观察最终细胞增殖及放大培养效果。
材料&方法
本次研究主要采用的耗材&设备
LeProlif®️ Sphere球状微载体
LeProlif®️ Sphere球状微载体是一种用于高产量培养贴壁细胞的微球状载体，为动物细胞的生长提供了适宜的表面，并可用于悬浮培养系统中。还可用于增加单层细胞培养容器(例如培养板、培养皿及培养瓶)及灌流室中的细胞产量。
• 以交联葡聚糖为基底
• 贴壁面积约为4400cm2/g
• 特殊的材料表面改性工艺提高细胞贴壁率及均匀度，支持高密度灌流培养
• 可在台式生物反应器/一次性生物反应器内进行悬浮培养，方便放大
• 可将细胞从微球表面消化下来进行收货
LePhinix®️ EZG台式生物反应器
• 球状载体湿热灭菌后通过接管机无菌焊接后接入反应器内
• 可搭配不锈钢筛网进行灌流培养，将微载体截留在罐内进行换液操作或者收获细胞
• 工作体积：1 L - 10 L
• 1 个 10 L 台式生物反应器最高可培养 10 L ，载体浓度为3g/L，提供的细胞贴壁面积达到了132000cm2
研究步骤
01. 接种
种子细胞在T-flask里培养制备，最终接进2L的LePhinix®️ EZG台式生物反应器中。
02. 细胞培养设置及放大
我们在2L的LePhinix®️ EZG台式生物反应器中无菌接入LeProlif®️ Sphere球状微载体，针对Vero细胞在球状微载体上的生长进行测试，以掌握Vero细胞在台式生物反应器内的增殖特性，再通过球转球进一步放大至10L台式生物反应器中，为Vero细胞在生产逐步放大中的工艺应用提供了相应的参考。
研究结果
3g/L的载体浓度，1.2E5/mL的细胞接种密度，培养4天，从1.5L球转球放大至4L，再球转球放大至10L，细胞密度可扩增约12倍左右，活率均维持在90%以上，在玻璃罐内不同放大规模中表现出高度的一致性，球转球效果较好，见图1、图2和图3。
图1 Vero细胞球转球放大活细胞密度
图2 Vero细胞球转球放大细胞活率
球转球前
球上细胞消化
球转球后
图3 球转球过程中Vero细胞在微载体上的贴壁情况
研究结论
3g/L的载体浓度下，Vero细胞在罐内培养至第4天达到了1.4×106 cells/mL左右的细胞密度，为了保证球转球放大的成功率，1.4×106cells/mL的细胞密度并非是最高值，且可以通过提高载体浓度来提高最终的细胞密度。
在LePhinix®️ EZG台式生物反应器中，LeProlif®️ Sphere球状微载体具备能有效实现生产逐步放大工艺的能力。
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