食品安全国家标准 贝类中腹泻性贝类毒素的测定 1 范围 本标准规定了贝类中腹泻性贝类毒素测定的小鼠生物法,酶联免疫吸附法和液相色谱-串联质 谱法。 本标准中小鼠生物法和酶联免疫吸附法适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的测定,液相色谱- 串联质谱法适用于贝类可食部分及其制品(不包括盐渍制品)中腹泻性贝类毒素大田软海绵酸(OA)、 鳍藻毒素-1(DTX-1)和鳍藻毒素-2(DTX-2)的测定。
酶联免疫吸附法 7 原理 根据竞争性酶联免疫反应,游离的腹泻性贝类毒素与其酶标记物竞争腹泻性贝类毒素抗体。没有 被结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶底物和显色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将 无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝转变为黄色。用酶标仪在450nm 波 长下测量微孔溶液的吸光度值,试样中的腹泻性贝类毒素含量与吸光度值成反比,按绘制的标准曲线定 量计算。 8 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的一级水。 8.1 试剂 8.1.1 甲醇(CH3OH)。 8.1.2 十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)。GB5009.212—2016 4 8.1.3 氯化钠(NaCl)。 8.1.4 (KCl)。 8.1.5 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 8.1.6 吐温-20(C58H114O26)。 8.1.7 牛血清白蛋白(BSA)。 8.1.8 酶标记物。 8.1.9 过氧化氢(H2O2)。 8.1.10 3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB,C16H20N2)。 8.1.11 硫酸(H2SO4)。 8.2 试剂配制 8.2.1 甲醇溶液(90%):量取90mL甲醇,加入10mL水,混合均匀。 8.2.2 磷酸盐缓冲液(PBS溶液,pH7.4):分别称取磷酸二氢钾0.20g、十二水合磷酸氢二钠2.90g、氯 化钠 8.00g0.20g,加水溶解并定容至1000mL。 8.2.3 酶标记物稀释液:称取1.0gBSA,加 PBS溶液溶解并定容至1000mL。 8.2.4 酶标记物工作液:用酶标记物稀释液将酶标记物稀释至工作浓度。 8.2.5 洗脱液:吸取0.5mL吐温-20加入 PBS溶液中,并稀释至1000mL。 8.2.6 硫酸溶液(1mol/L):吸取53.2mL硫酸,缓缓加至900mL水中,并用水稀释至1000mL。
