在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的:
酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
小鼠(EPO)ELISA Kit
Mouse Erythropoietin,EPO ELISA Kit
小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)去除颗粒。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.