在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的:
包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
小鼠(TNF-α)ELISA KIT
Mouse Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒 | 进口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)去除颗粒。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.