071409Rb，血红蛋白（HB）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）
仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
[预期应用]
本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清 或其它相关生物液体中待检测指标含量。
[试剂盒内容]
| 试剂名称 | 数量 | 试剂名称 | 数量 |
| 96孔板（预包被） | 1 | 96孔板覆膜 | 4 |
| 标准品（液体） | 2 | 标准品稀释液 | 1×20mL |
| 检测溶液A（绿色） | 1×120μL | 检测稀释液A（2×） | 1×6mL |
| 检测溶液B（红色） | 1×120μL | 检测稀释液B（2×） | 1×6mL |
| TMB底物 | 1×9mL | 终止液 | 1×6mL |
| 浓洗涤液（30×） | 1×20mL | 使用说明书 | 1 |
[标本的采集与保存]
1、 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4oC过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20oC或-80oC保存，但应避免反复冻融。
2、 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8oC 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存，但应避免反复冻融。
3、 组织匀浆：
1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.02mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；
2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL预冷PBS进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2次）。
3） 将制备好的匀浆液于5000×g离心5分钟，留取上清即可检测。
4、 细胞培养上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存，但应避免反复冻融。
注意：
1、 以上标本均需密封保存，4oC保存应小于1周，-20oC不应超过1个月，-80oC不应超过2个月。
2、 标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、 标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。[实验原理]
将待检测抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的待检测指标与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的待检测抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待检测指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。
[实验流程]
1、实验前标准品、试剂及样本的准备；
2、加样（标准品及样本）100μL，37oC孵育2小时；
3、加检测溶液A100μL，37oC孵育1小时；
4、洗板3次；
5、加检测溶液B100μL，37oC孵育30分钟；
6、洗板5次；
7、加TMB底物90μL，37oC孵育15－25分钟；
8、加终止液50μL，立即450nm读数。
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