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透析袋处理

透析已成为生物化学实验室zui简便zui常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。

透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。

透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。

透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的zui多的还是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美国美国光谱医学公司spectrum和美国Union Carbide联合碳化物公司，各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的zui小分子量，缩写为MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类，单位为道尔顿（D）。

商品透析袋制成管状，其扁平宽度为8 mm～77 mm不等。为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。

    1.将透析管剪成适当长度（10-20cm）的小段，即成透析袋。

    2.在大体积的2%（m/v)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH=8)中将透析袋煮沸10min。

    3.将透析袋用蒸馏水*漂洗。

    4.将透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。

    5.透析袋冷却后存放于4度，应确保透析袋始终浸没在液体中。

注：从此步起用透析袋时一定要戴手套操作。

    6.在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。

注：也可以将透析袋放在广口瓶中充满水，松动瓶盖，于20psi（1.40kg/cm2)高压灭菌10min，代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。

使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。

新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。

美国光谱医学公司生产的透析袋大部分是预处理过的，即用型，使用前只需用蒸馏水冲洗即可使用，spectra/por7系列和生物技术级的透析袋基本不含硫化物和重金属离子。

使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加50％是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。

检查透析效果的方法是：用1％ BaCl2检查(NH4)2SO4，用1％ AgNO3 检查NaCl、KCl等。

为了提高透析效率，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国美国光谱医学公司生产的各种型号的透析设备，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。

选用透析袋需要知道目的物质的分子量，每次处理的样品量，同一批次的平行试验，是否需要保持目的物质的活性来选择。

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