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人ELISA试剂盒实验原理的步骤

时间:2020/11/4
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人ELISA试剂盒实验原理:

将目标抗体包被于微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入人ELISA试剂盒微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。

人ELISA试剂盒性能:

1. 灵敏度:小的检测浓度小于1号标准品。人ELISA试剂盒-ⅢELISA检测试剂盒稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

人ELISA试剂盒操作注意:

1.不同的试剂盒因工艺和操作方法略有不同,务必按照所用人ELISA试剂盒说明书严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性.

2.若不同批号人ELISA试剂盒的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。

3.反应时间的误差,做大量标本时,一孔和后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。

4.临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

5.加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响,建议校对加样器。 

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