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多克隆抗体和单克隆抗体的用途盘点

时间:2022/11/11
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单克隆抗体的定义:

单克隆抗体是仅与目标蛋白某一特定表位结合的单一抗体。

 

单克隆抗体的制备:

简单来说就是将免疫原注射到宿主动物体内产生免疫反应,之后把 B 细胞从脾脏中移出,单种 B 细胞与骨髓瘤细胞融合为 B 细胞杂交瘤,成为一个永生化胞株。这样一来,杂交瘤的 B 细胞就会一直产出只识别单一表位的单克隆抗体,通常这个胞株会有一个特定的克隆号(clone number),用来与其他胞株区分。杂交瘤接下来可以被注射到小鼠的腹腔中大量,杂交瘤分泌富含抗体的一种液体,被称作腹水,用注射器抽取纯化,就可获得大量的单克隆抗体。

 

多克隆抗体定义:

多克隆抗体是指与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体.

 

多克隆抗体制备:

多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样,都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应,激活了多种B细胞。不同的是免疫过后,多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来,或接着进行纯化,没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡,需要免疫新的动物,这时血清中的抗体就会有所不同。虽然多抗每批次有轻微差别,但是因为它识别的表位多,这个差别影响并不算太大,而单克隆抗体虽然价格偏高,可是特异性更强更稳定。可以说单抗和多抗是各有各的优点。

 

多克隆抗体和单克隆抗体的用途:

1、定义多克隆抗体和单克隆抗体有用性的两个关键特征涉及它们各自对抗原的特异性和灵敏度。

2、抗体的特异性是由其结合域和目标抗原之间的相对亲和力决定的,而其他分子是存在的。对这种特异性的利用对免疫学研究人员和临床医生来说是至关重要的,因为许多应用都是利用多克隆和/或单克隆抗体来专门检测目标分子。结合抗原特异性,抗体的灵敏度是一个重要的参数,决定了它在实验室的实用性。 

3、高灵敏度的抗体非常适用于诊断应用,如免疫沉淀、West Blot 和酶联免疫吸附试验(ELISA),因为它们能够识别低水平的目标抗原。

免疫沉淀是一种分析技术,通过使用特异性结合抗原的抗体将抗原从混合物中分离出来。然后用固定化抗体或磁珠对产生的抗原-抗体复合物进行进一步处理,从而使抗原-抗体复合物在分析前从混合物中分离出来。

4、与免疫沉淀法一样,ELISA 可以使用多克隆或单克隆抗体来检测溶液中的目标抗原。

5、间接和夹心 ELISA 是两种免疫测定形式,在整个过程中使用两种类型的抗体:单克隆抗体由于对目标抗原的高特异性,通常首先应用(一级);多克隆抗体由于能够以高灵敏度放大低信号,因此作为二级试剂更有用。

6、除了 ELISA,抗体对于免疫组化和流式细胞仪等检测技术也很有用,因为它们可以以高分辨率检测复杂组织或细胞内的抗体-抗原构建。

企业对抗体特异性和灵敏度的确认使得像 ELISAs 这样的免疫测定可以根据抗原和抗体的使用方式而采取不同的形式,这使得这些测试具有高度的通用性。例如,一种免疫测定需要高度敏感的测试来检测一种未知的病原体,由于多克隆抗体能够识别一种抗原上的多个表位,因此会从多克隆抗体中获益。如果一个病原体或抗原先前已经被定性,那么在下游应用中使用单克隆抗体来进一步定性可能更合适。

7、在实验室外,抗体可以被用来增强、模仿或恢复免疫系统攻击疾病目标的能力。除了一些例外,单克隆抗体比多克隆抗体更适合于治疗目的,因为它们具有同质性,对单一表位的高特异性和低程度的交叉反应。

8、这些特性对于有效的癌症治疗特别重要,因为肿瘤细胞能够逃避或阻断免疫系统。单克隆抗体疗法对癌细胞发挥作用的一些方式包括涉及直接结合以诱导细胞死亡的机制和阻断肿瘤生长因子和血液供应的间接机制。


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