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酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
在这种测定方法中有3种必要的试剂:
1、固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)
2、酶标记的抗原或抗体(标记物)
3、酶作用的底物(显色剂)测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。
ELISA试剂盒特点:
一、特异性
ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的要害组分,抗体对有关。若抗体对中为多抗,另一个有必要为单抗,建议运用双单抗。挑选一个好的ELISA试剂盒,咱们首先要考虑的就是特异性。
二、灵敏度
ELISA试剂盒的好坏往往就取决于灵明度的高低,因而灵敏度也是咱们挑选ELISA试剂盒的一个重要技术参数。灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的量的才能,用户可根据自己样本中待检目标的量挑选合适的试剂盒,假如待检目标量很低,一般的试剂盒不能满足要求,可挑选高敏的ELISA试剂盒。
三、重复性
科学实验讲究重复性,一般 ELISA试剂盒,其板内和板间变异系数应该控制在 15% 以内。
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