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原代细胞

原代细胞的传代操作过程

时间:2025/4/21
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  原代细胞是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞,称为原代细胞。
 
  原代培养原理将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
 
  一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。
 
  那么关于原代细胞的传代培养,一般有以下两种方法,具体操作步骤
 
  一、贴壁细胞的消化法传代
 
  1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。
 
  2、加入1ml左右消化液(胰蛋白鳄或与EDTA混合液)轻轻接动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中.
 
  3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消化。
 
  4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中继续培养.第二天观察贴壁生长情况。
 
  二、悬浮细胞的传代
 
  1、直接传代
 
  ①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3。
 
  ②用吸管吹打形成细胞悬液后,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。
 
  2、离心法传代
 
  ①将细胞连同培养液一并转移到离心管内,离心800-1 OOOrpm, 5分钟。
 
  ②去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液。
 
  ③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。
 

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