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货号 | 产品名称 | 规格 |
AS6321291 | 土壤硝酸还原酶(SNR)测试盒(比色法) | 100管/48样 |
AS6321291 | 土壤硝酸还原酶(SNR)测试盒(比色法) | 50管/24样 |
测定意义
S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥,降低氮素的损失具有重要意义。
测定原理
S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法测定。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一:液体12mL×1瓶,-20℃保存。
试剂二:液体8mL×1瓶,-20℃保存。
试剂三:液体9mL×1瓶,4℃保存(如出现结晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用)。
试剂四:液体9mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:标准品储备液1mL,-20℃保存。
0.1μmol/mL标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取 0.1ml 加蒸馏水定容至 10ml。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
试剂名称 | 1mL带盖离心管 | |||
测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 | |
风干土样(g) | 0.06 | 0.06 | ||
0.1μmol/mL标准液(μL) | 60 | |||
蒸馏水(μL) | 225 | 285 | ||
试剂一(μL) | 225 | 225 | ||
试剂二(μL) | 75 | 75 | 75 | 75 |
混匀后,盖盖后37℃水浴24h,8000g 25℃离心10min,取上清液
上清液(μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
试剂三(μL) | 85 | 85 | 85 | 85 |
试剂四(μL) | 85 | 85 | 85 | 85 |
混匀,25℃显色20min,4000g,25℃离心10min,取200uL上清液至微量石英比色皿或96孔板中,540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
注意点:
务必先做2个样本的预测定,少部分土壤由于样本特殊性可能出现测定管小于对照管,请及时与我司技术支持联系,以获得针对样本特殊性的调整测定方法。
S-NR活性计算:
单位的定义:每天每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR活力单位。
S-NR(μmol /d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷W÷T =0.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准管:标准管浓度,0.1μmol/mL;V反总:反应体系总体积,0.3mL;T:反应时间,24h; W:样本质量,0.06g。
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