细胞的冻存方法
一个实验室得到一个新的细胞株后，首先要把该细胞株培养扩增后冻存起来。细胞冻存首先可以在由于污染等情况丢失细胞时有备份可用，另外几乎所有细胞在培养传代的过程中发生一定程度的变异，为了保持实验结果的一致，一般细胞在培养几十代以后就不能再使用了，需要将冻存的，传代较少的细胞化冻培养再使用。
细胞冷冻过程有四个要点：细胞的收获、保护剂的使用、冷冻速率和储存环境。
在这里给大家简述下这个四个要点：
细胞的收获
用来冻存的细胞一般选择在细胞约铺满90%的时候，这时细胞生长状态好，细胞数量也多，并且在收获细胞前24小时换一次培养液。收获用来冻存的细胞开始时方法和平时一样，用100xg离心5分钟收集细胞再重悬，活细胞记数。稀释或浓缩到细胞保存的zui终细胞浓度的二倍（一般是400-1000万细胞/ml），加入已经配好的等体积的培养液保护剂混合溶液中轻轻混匀，分装到冻存管，冷冻保存。
保护剂的使用
细胞冻存中，一般使用DMSO作为保护剂。在细胞冻存中，DMSO使用的zui终浓度一般是5-15%，某种具体细胞的冻存液中的DMSO浓度可以从ATCC查到。对特别敏感的细胞特别是杂交瘤细胞在冻存时使用95%血清和5%DMSO可能会好些。保护剂在使用时先用培养液或血清配成zui终浓度的2倍，再与等体积的悬浮细胞的培养液混合。
细胞冻存的速率
细胞的冷冻速率zui是控制在让细胞有足够的时间脱水而又不被过度脱水导细胞损害。对大多数细胞来说，每分钟降1至3℃是合适的。通常的操作是把细胞先在-20℃1-2个小时，再放入-80℃冰箱过夜（如果没有-80℃冰箱，可以用干冰替代），再转入液氮罐或低于-130℃的冰箱长期保存。
另外一个办法是，在-20℃1-2个小时以后，把冷冻管悬掉在液氮罐的气相中，以控制冷却的速率。这个方法比较简单，因为细胞也可以在液氮罐的气态中长期保留，所以不用计时。对于没有-80℃冰箱，或者购买干冰不方便的人来说，这是一个比较好的办法。
储存环境
细胞长期保存温度是-130℃或更低。液氮罐中气态层温度在-140℃至-180℃之间，细胞可保存在气态层或浸入液氮中，如果可能保存在气态层，因为这样可避免由于有液氮进入冻存管而在拿出细胞时引起爆炸（但是这样液氮罐内只能存储少量液氮，需要经常添加）。细胞也可以在-80℃冰箱保存几个月左右的时间。
