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上海博麦德生物技术有限公司
主营产品： 培养基,生物培养基 |
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上海博麦德生物技术有限公司
主营产品： 培养基,生物培养基 |
2012-9-28
| 提 供 商 | 上海博麦德生物技术有限公司 | 资料大小 | 54.4KB |
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| 资料图片 | 【点击查看】 | 下载次数 | 180次 |
| 资料类型 | JPG 图片 |
细 胞 融 合
【实验目的】
掌握细胞融合原理、应用 PEG 融合细胞的方法以及细胞融合率的计算。
【实验用品】
一、材料 鸡红细胞
二、器材和仪器：显微镜、离心机、水浴箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片
三、试剂 50％PEG（MW4,000）、Hanks 液（pH7.4）
【实验内容】
一、原理
细胞融合（Cell fusion），即在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使
两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为
一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，
因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒（Sendai virus），聚乙二
醇（Polyethyleneglycol，PEG）和电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简
便，且融合效果稳定。PEG 的促融机制尚不*清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极
性基团发生结构重排。
二、方法
（1）取新鲜鸡血以 0.85％生理盐水制成 10％的悬液。
（2）称取 0.5 克 PEG（MW=4,000）放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入 0.5ml 预热
的 Hanks 液混匀制成 50％的 PEG 溶液。放入 37℃水浴中待用。
（3）取上述 10％的鸡红细胞悬液 1ml 放入离心管中，再加入 5ml Hanks 液混匀，然后
以 1,000rpm 离心 5 分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
（4）取上述 50％PEG 溶液 0.5ml，在 1 分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混
匀。待 PEG 全部加入后静置 1 分钟左右。此全部过程都要求在 37℃水浴内进行。
（5）缓慢滴加 9ml Hanks 液以终止 PEG 的作用，在 37℃水浴内静置 5 分钟。
（6）离心弃上清后，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。
三、结果观察
在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细
胞。要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。
四、融合率的计算
