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α-酮戊二酸含量测定操作说明书-齐一生物
2020-9-4 阅读(3491)
α-酮戊二酸是微生物三羧酸循环中重要的代谢中间产物，是连接细胞内碳-氮代谢的关键节点，在循环中的位置位于异柠檬酸之后以及琥珀酰辅酶 A 之前。在这一部位，回补反应可以通过自谷氨酸的转氨基作用产生α-酮戊二酸而达到补充此中间代谢产物的目 的。
α-酮戊二酸含量测定原理：
α-酮戊二酸与衍生剂反应，产生紫外下有吸收的物质，利用高效液相色谱法分离，紫 外检测器测定其含量。
α-酮戊二酸含量测定需自备的实验用品：
高效液相色谱仪（C18 柱，紫外检测器）、低速离心机、超声波清洗器、溶剂抽滤装置、滤膜（水系和有机系各 1 个，0.45μm）、针头式过滤器（水系，50 个，0.22μm）、可调式移液器、样品瓶（50 个，2mL）、甲醇（色谱级）、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和超纯水。
试剂的组成和配制：
实验前的准备工作：
α-酮戊二酸的提取：
称取约 0.2g 样本，放入研钵中磨碎，加入 0.2mL 预冷的试剂一，以及 0.5mL 预冷的超纯水， 移入 EP 管内，4 oC 浸提 60min，10000g，4 oC 离心 10min，提取上清液。
α-酮戊二酸的衍生反应：
α-酮戊二酸含量标准品的配制：
齐一生物拥有多台高效液相色谱仪、气象色谱仪、液质联动仪，可以提供完善的代测检测服务。能为各位老师、同学提供完善的检测服务，提供全套图谱、原始数据和全套检测计算过程及结果。
