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纤维素含量测定样品的前处理-齐一生物
2018-10-22 阅读(1460)
纤维素(CLL)含量测定原理:
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
纤维素含量样品的前处理:
1、 细胞壁的提取:取约 0.3g 样本,加入 1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴 酮各洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、 纤维素的提取:称取烘干的 CWM 约 5mg,加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆,匀浆液转移至 EP 管中,用蒸馏水定容至 0.5mL,置于冰水浴中,缓慢加入 0.75mL 浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
纤维素含量测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制:在试剂二中加入 4mL 试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用不完的试剂 4℃保存一周;4、
齐一生物主要经营进口原装Elisa试剂盒,自产品牌QIYBIO试剂盒。并提供免疫分析相关试剂及检测试剂盒。