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植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒操作说明
2016-3-17
 提 供 商 |
齐一生物科技（上海）有限公司 |  资料大小 |
23.3KB |
|---|---|---|---|
 资料类型 |
PNG 图片 |  资料图片 |
|
 下载次数 |
52次 |
植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
测定意义：
淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉
中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降
低，因此又称为液化酶。
测定原理：
还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在 70℃钝化 15min，从而
测定α-淀粉酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：25mL×1 瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；
试剂二：20mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
称取 0.1~0.2g 样本（建议称取约 0.1g 样本） ，加 1 mL 蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，
在室温下放置提取15min，每隔5min 振荡 1次，使其充分提取；3000g，室温离心 10min，
吸取上清液并且加蒸馏水定容至 10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
操作步骤和加样表（在1.5mLEP 管中依次加入下列试剂） ：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。
1、β-淀粉酶灭活：
试剂（μL） 对照管 测定管
α-淀粉酶原液 250 250
70℃水浴15min 左右，冷却
2、加入试剂一并且保温：
试剂一 500
将以上对照管、测定管和试剂二置于 40℃恒温水浴中保温 10min 左右
3、准确反应 5min
试剂二 250 250
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min
4、加入试剂一，并且混匀
试剂一 500
混匀，室温静置 10min，蒸馏水调零，540nm 处读取对照管和测定管吸光度，计算ΔA=A
测定管-A对照管。
植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒说明书α-淀粉酶活性计算：
1、标准条件下测定回归曲线为 y=0.0895x -0.022； x 为标准品浓度（mg/mL） ，y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
（1）按照样本质量计算
单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(U/g 鲜重)=[(ΔA＋0.022)÷0.0895×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=89.4×(ΔA＋
0.022)÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(U/mg prot)= [(ΔA＋0.022)÷0.0895×V反总]÷ （V样×Cpr） ÷T=8.94×(ΔA＋0.022)
÷Cpr
V 反总：反应体系总体积，1mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V 样总：提
取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，
5min。
