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展青霉素酶联检测试剂盒资料下载
2017-9-5
 提 供 商 |
齐一生物科技（上海）有限公司 |  资料大小 |
13.8KB |
|---|---|---|---|
 资料类型 |
JPG 图片 |  资料图片 |
|
 下载次数 |
47次 |
展青霉素酶联免疫试剂盒
1．概述
展青霉素酶联免疫反应测试盒是利用竞争性的酶联反应原理，用于饲料、蜂蜜、肉类（牛肉、鸡肉和猪肉）、鱼虾、牛奶、组织、血清和尿液中展青霉素残留的定量检测。
该试剂盒具有以下特点：
- 快速，高回收率(75-95%)，多种样品的低成本提取方法。
- 高灵敏度（0.1ng/g或ppb），低检测下限（牛奶0.5ng/g或ppb）。
- 高重复性。
- 检测过程只需要不到1.5小时。
展青霉素酶联免疫试剂盒2．试剂盒原理
展青霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有展青霉素的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同酶标抗原被添加到板孔中。如果样品中含有药物，会竞争抗体，抑制抗体与酶标抗原结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中药物的浓度成反比。
3．试剂盒组成
内容物 | 规格 | 保存条件 |
展青霉素抗体包被板 | 96孔板（12×8 孔） | 2-8℃ |
展青霉素标准品： 0ng/ml阴性质控 0.1ng/mL 0.25ng/mL 0.6ng/mL 1.5ng/mL 5.0ng/mL 回收用1000ng/ml |
1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL | 2-8℃ |
酶标（patulin-HRP) | 6mL | 2-8℃ |
10×样品提取液(10X Sample Extraction Buffer ) | 25mL | |
20×浓缩洗液(Wash Solution) | 28mL | |
终止液(Stop Buffer) | 14mL | |
TMB底物(TMB Substrate) | 12mL |
本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过1个月不使用试剂盒，请
将展青霉素HRP酶标记物 放置-20℃或者冰冻保存。
展青霉素酶联免疫试剂盒
4．检测限
检测物质 | 检测下限（ng/g） |
饲料 | 1 |
蜂蜜 | 2 |
肌肉/肝脏/肾脏/鱼类/虾 | 1 |
牛奶 | 0.5 |
血清 | 0.5 |
尿液 | 0.5 |
5．交叉反应
药物 | 交叉反应% |
展青霉素(patulin) | 100 |
恶喹酸(Oxolin acid) | 40 |
吡哌酸(Pipemidic acid) | 18 |
氧氟沙星(Ofloxacin) | 17 |
环丙沙星(Ciprofloxacin) | 9 |
恩诺沙星(Enrofloxacin) | 6 |
氟甲喹(Flumequin) | 6 |
西诺沙星(Cinoxacin) | 1 |
6．未提供的设备或材料
- 酶标仪
- 恒温培养箱
- 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
- 漩涡振荡器
- 匀质器
- 多道移液器（50-300mL）
7．注意事项
实验前请阅读以下文字，以保证获得实验效果。
- 标准品中含有展青霉素，请小心使用。
- 不要使用过期的试剂盒。
- 不同批次的试剂盒不要混用，酶标记物和微孔板具有盒与批次的特异性。确保其正确使用。
- 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。
- 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
- 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。
- 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。
- 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
- 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。
8．试剂的准备
所有的试剂在使用之前应将其回温至室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。
（1）1×样品提取液
按1：9的比例配制10×样品提取液和蒸馏水。
（2）35%的(甲醇)/(样品提取液)溶液
按6.5：3.5的比例配制1×样品提取液和100%的甲醇。
9．样品的准备
(样品在使用前请保存在2-4°C下)
饲料
- 取一定量的样品，添加5倍的70%的甲醇（如：1g样品中加入5mL的70%的甲醇），漩涡振荡混匀；
- 取1.5mL匀质样品，室温下4000g离心5分钟。
- 取0.5ml 上清液，加入0.5ml 1x 样品提取液，混匀。
- 每孔取100μl用于检测。
稀释倍数：10
蜂蜜
- 称取0.1g蜂蜜样品，加入1.9ml的35%乙醇/样品提取液，混匀
- 每孔取100ul用于检测。
稀释倍数：20
肉类/肝脏/肾脏/鱼/虾
- 取1g 匀质去脂肪样品，加入4ml 70% 甲醇。
- 转速涡流震荡10分钟。
- 室温下4000g 离心5分钟。
- 取0.5ml 上清液，加入0.5ml 1x 样品提取液，混匀。
- 每孔取100μl用于检测。
稀释倍数：10
牛奶
- 有脂肪的奶粉，取1ml牛奶，4000g离心5分钟，去除上层脂肪。(脱脂奶粉省略这一步)
- 取200μl牛奶样品，加入800μl 35% 甲醇/样品提取液，混匀。
- 每孔取100μl 用于检测。
稀释倍数： 5
血清/尿液
- 取0.5mL 样品，在4000g离心5分钟；
- 取,0.2 mL上清液，加入0.8mL 35% 甲醇/样品提取液，混匀。
- 每孔取100μl 进行检测。
稀释倍数：5
10．酶联免疫反应测试步骤
所有试剂使用前回到室温，试验中用到的试剂现用现配，多余的试剂不能倒回原先的瓶子里，避免试剂的交叉污染。
1×工作洗液
按1：19的比例配制浓缩洗液和双蒸馏水。
检测
以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。
试剂 | 每个反应需要的体积 | 24次反应的体积 |
酶标 | 50 mL | 1.2mL |
工作洗液 | 2 mL | 48 mL |
终止液 | 100 mL | 2.4 mL |
底物 | 100 mL | 2.4 mL |
- 加入100mL的标准液或样品于所设定的孔中；
- 每孔加入50mL 酶标（避免阳光直射和工作台温度过低，孵育时适当覆盖微孔板）；
- 室温（20-25℃）孵育60分钟；
- 洗板3次，每次应该加入250mL，一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；
- 加入100mL的TMB底物（底物本身是无色的，出现颜色变化不能使用。孵育时适当覆盖微孔板）；
- 加入底物后立即计时，轻敲试剂盒使混匀；
- 在室温下培养15分钟，加入100mL的终止液终止反应，在450nm下读OD值(读数前用无绒布擦拭微孔底部水分和指模)。
11．结果计算
（1）分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。
相对吸光度值 (%) =(标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100
（2）以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。
（3）从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。
展青霉素酶联免疫试剂盒备注：如结果呈阳性反应，应该用其他检验方法（如色谱/质谱方法等）进行确证。
以下曲线图是展青霉素酶联免疫反应测试盒典型标准曲线
