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碱性磷酸酶染液说明书

2015-10-15  

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碱性磷酸酶染液说明书 (Cell Alkaline Phosphatase Stain) 
【检验原理】 
细胞中碱性磷酸酶(cAKP)在碱性的缓冲液中,催化底物水解,生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联,生
成不溶性的偶氮染料,沉着于有cAKP活性的部位。适用于血涂片、骨髓涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片以及
石蜡切片脱蜡梯度入水后。 
【试剂组成】 
可染 20~30 张涂片 
编号  试剂组成  外观 
R1  固定液 10ml×1瓶  无色透明液体 
甲液  溶剂5ml×2瓶  无色透明液体 
乙粉  粉剂×2支  白色粉末  R2 
丙粉 粉剂×2支  黄色粉末 
苏木素染液 5ml×1瓶  紫红色液体 
R3 
甲基绿5ml×1 瓶  绿色液体 
本所附赠疏水膜1张。 
【储存条件及有效期】 
本试剂盒应置室温密封保存,有效期6个月。 
【试剂配制】 
〇 底物应用液的配制:临用时将 1 支乙粉剂倒入 1 支甲溶剂中,用微量移液器取少许液体打入小离心管中,
反复颠倒离心管,再用微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中,如此反复2~3次,使二者充分混合,完
全溶解后才可加入1支丙粉剂,再充分摇动使其*溶解,配成底物应用液待用。底物应用液要新鲜配制,
用多少配多少。 
【操作步骤】 
① 固定:新鲜血涂片、骨髓涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片以及石蜡切片用固定液固定3 min左右。 (石
蜡切片脱蜡梯度入水后不需固定) 
② 加底物应用液:固定后的样本,滴加新鲜配制的底物应用液盖满样本部分,加盖疏水膜,放置湿盒中,
避光37℃孵育 15min,水洗。(此时覆盖在样本上的疏水膜会遇水掉下) 
③ 复染:趁湿用复染液(苏木素或者甲基绿,两者取其一)染3min左右。水洗,镜检。 
【染色结果】 
血涂片及骨髓涂片的观察: 选涂片中厚薄均匀的部位滴加香柏油用油镜检查,灯光适中。细胞核呈紫色, cAKP
阳性者胞浆中出现红至红棕色颗粒,有些为棕褐色或咖啡色颗粒,其强度可按Kaplow记分法表示。 
0 胞浆内无红色或无咖啡色; 
1 弥散的红色并偶见红色或咖啡色颗粒; 
2 弥散的红色,有中等量的红棕色颗粒; 
3 显著的红色,有较多的红棕色或咖啡色颗粒; 
4  显著的红色并有粗大的红棕色或咖啡色、深咖啡色颗粒充满胞浆。 

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