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上海人组织因子途径抑制物（TFPI）ELISA试剂盒操作方法双抗体夹心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释蛋白质含量为1～10μg/ml.在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃隔夜.次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟.（简称洗涤,下同）.

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时.然后洗涤.（同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔）.

3.　加酶标抗体：于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml.37℃孵育0.5～1小时,洗涤.

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10～30分钟.

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml.

6.　结果判定：可于白色背景上,直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示.也可测OD值：在ELISA检测仪上,于450nm（若以ABTS显色,则410nm）处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性.

间接法1.用包被缓冲液将已知抗原稀释1～10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃隔夜；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟,洗涤；

6.’zui后一遍用DDW洗涤.

其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6.

发展前景

临床测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用.分子生物学正在并zui终肯定会让对整个生命科学有一个全面而*的认识,其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,对以前一些难以检测的生物活性物质的测定,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性.人神经激肽B(NKB)ELISA试剂盒 
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