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详细介绍
产品名称：FlashPfu DNA 聚合酶
英文名称：FlashPfu DNA Polymerase
FlashPfu DNA 聚合酶价格产品规格：
产品编号 | 产品规格 | 产品价格 |
TB10011A | 100 U | ￥990 |
TB10011B | 250U | ￥1690 |
FlashPfu DNA 聚合酶价格产品描述：FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通过融合特殊持进能力增强因子与精心改造过的pfu DNA聚合酶，是来源于超嗜热古细菌的DNA聚合酶。该酶具有5'→3' 聚合酶活力, 3'→5' 核酸外切酶活力，并产生平头末端产物。由于其具有高效的3'→5' 核酸外切酶活力（校正活力），使得PCR能获得很好的保真性，FlashPfu DNA聚合酶的错配率约为Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的zui快延伸速率可达5−6 kb/min，对于复杂模板也可达到2 kb/min。
特点与应用：
1、高保真PCR——保真性为Taq DNA聚合酶的50倍
2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb
3、长片段PCR——基因组DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb
4、生成用于平头末端克隆的PCR产物
5、定点突变
活力单位定义：75°C、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位（U）。
储存条件：储存于-20℃。
注意事项：
1、请等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)*溶解后再配制PCR反应体系。
2、为了获得的扩增效果，扩增前的所有操作请在冰上进行。在室温下，聚合酶活力可能会产生非特异性扩增。并且请将FlashPfu DNA Polymerasezui后加入反应体系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力导致引物降解。
3、本产品扩增产物的克隆请按照平头末端克隆方法操作。
4、引物设计：
1）引物Tm值计算请使用zui邻近法。请不要使用其他计算方法，它们计算得到的Tm值偏低，不适合本产品。
2）引物长度控制在20−35碱基，并且Tm > 60°C。
3）引物的GC含量尽量控制在40−60%。
4）在引物3’端以G或C结尾，可提高引物和模板结合效率。但是要避免3’端避免有多个G或C，防止非特异性结合。
5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。
6）正、反向引物的3’端避免相互互补。
7）扩增长片段时，引物长度控制在25−35碱基。
8）进行定点突变时，请将错配碱基靠近5’端。若错配碱基靠近3’端，可能会受本酶校正。
不要使用含有尿嘧啶和次黄嘌呤核苷的引物。
应用举例：对于复杂模板的极限延伸速度
步骤1. 按下表所示，在50 µl PCR体系中加入100 ng人基因组：
成分 | 体积 | 终浓度 |
2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+) | 25 μl | 1× |
2.5 mM dNTP | 4 μl | 0.2 mM each |
10 μM Forward Primer | 2.5 | 0.5 μM |
10 μM Reverse Primer | 2.5 | 0.5 μM |
FlashPfu DNA Polymerase | 1.0 μl | 1 U |
Nuclease-free water | To 50 μl |
|
100 ng/μl human genomic DNA | 1 μl | 100 ng/50 μl |
步骤2. 设置PCR程序：
2步法 | |||
步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
预变性 | 98°C | 3 min | 1 |
变性 | 98°C | 10 sec | 30 |
延伸 | 72°C | X min | |
延伸时间:
X= 1 min (10 s/kb)
1.5 min (15 s/kb)
2 min (20 s/kb)
3 min (30 s/kb)
该案例中所用的引物：
6 kb β-globin target
FP: ACAAGGGCTACTGGTTGCCGATTTTTATTG
RP: GGGACTGGCCTCAGAGGAAACTTCAGG
案例结果电泳图：
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