免疫印迹技术服务

闪晶生物为您提供全套免疫印迹(western blot)技术服务和相关的试剂耗材。主要实验步骤如下：

• 蛋白质抽提

  • 实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。

  • 实验对象为细胞样品每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。

2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。 
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进*个孔中，电泳分离蛋白。 
4. 蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。 
5. western blot膜的封闭和抗体孵育

• 膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。

• 封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。

• 加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。

6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。 
7. western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。