产品描述

Cyanine3（Cy3），是花青素荧光素染料家族的成员之一，是化学合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以两种异构体的形式供货，一种是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines），一种是磺化花青素（sulfonated cyanine）。两者的光谱性质几乎一致，因此大部分应用可相互替换，比如，都可用于标记DNA或蛋白等生物分子。两者的主要区别在于：磺化染料是水溶性的，在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂，并且降低染料在水中聚集的可能性，增强标记效率。

本Cyanine 3（Cy3）是以磺化染料的形式供货，易溶于水，Ex=555 nm，Em=565 nm，具有明亮荧光，光稳定性强，pH非敏感性等优点，适用于标记多肽、蛋白以及核酸等生物分子，以通过后续荧光成像以及其他荧光生物学方法分析目的蛋白。

本Cy3 NHS ester，即含N-羟基琥珀酰亚胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基团的Cy3，可直接与生化分子上的氨基（-NH₂）反应形成稳定的酰胺键，主要是伯胺。

产品简介：

英文别名（English Synonym）	Cyanine 3, monosuccinimidyl ester
分子量（Molecular Weight）	829.03
外观（Appearance）	紫色固体
Ex/Em	555nm/565nm
溶解性（Solubility）	溶于DMSO，DMF，水
结构式（Structure）

供应商：西安凯新生物科技有限公司

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运输和保存方法

冰袋运输。-20℃干燥避光保存，有效期1年。

注意事项

1）NHS ester基团对湿度非常敏感，务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20min。

2）NHS ester基团的水解发生在水溶性缓冲体系属于竞争性反应。对蛋白/多肽（浓度：1-1mg/ml）伯胺的连接反应建议在pH 7-9范围内进行。使用不含氨基的缓冲体系，pH 7-9。比如100 mM 磷酸钠，150 mM 氯化钠， pH 7.5； 100mM Hepes, pH 7.5。100 mM 碳酸钠/碳酸氢钠, pH 8-9；或100mM 硼酸缓冲液, pH 8-9。

3）不要使用含伯胺的任何缓冲液，比如Tris，甘氨酸。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法（用Cy3-NHS Ester 标记抗体）

【注意】：可参考本方法进行多肽，蛋白或者其他分子的标记，需要根据具体的实验体系对合适的标记缓冲体系，样本浓度，染料浓度等参数做出合适的调整。

1）用不含氨基的合适的缓冲液（eg.100mM磷酸钠，150mM NaCl, pH7.5）溶解抗体使其浓度达到1-5mg/ml。【注】：如抗体中有残留Tris或 glycine 污染，则需透析或者脱盐到合适的缓冲液内。

2）使用前，用适量去离子水或者无水DMSO溶解Cy3-NHS，使其摩尔浓度为抗体摩尔浓度的400倍，例如，待标记的IgG浓度为1mg/ml（eg 6.7?M），则溶解后Cy3-NHS的浓度为2.7mM；如待标记的IgG浓度为2.5mg/ml，则溶解后Cy3-NHS的浓度为6.75mM；

3）向抗体中加入适量Cy3-NHS试剂，以达到预期的标记效率。【注】：当用Cy 3 NHS ester标记抗体或其他蛋白，亮度的偶联物其染料/蛋白的比率为4-12，取决于特定的应用。过高比率会增加非特异性背景，丧失抗体特异性结合，导致聚集。建议根据应用优化标记比率。

4）室温孵育60min（或更长）；

5）利用合适缓冲液透析或脱盐柱去除未反应的试剂；

6）分别在280nm和550nm检测Cy3-抗体的吸光值；

7）测定Cy3标记效率（DOL）和标记浓度。见下公式。

公式一. 利用下面公式计算Cy3标记效率（DOL）及其浓度（mg/ml）

Eq.1  Number of Cy3 dye per protein=molarity Cy3 dye / molarity protein

Eq.2  [Molarity of Cy3 dye]=A555/ε555

Eq.3  [Molarity of protein]=A280C/ε280

Eq.4  mg/ml=[A280-(A555×0.08)/(E1%/10)]×dilution factor

【注】上述参数如下： A555=conjugate absorbance at 555±2nm ε555=molarextinction coefficient Cys dye =150000M-1cm-1 A280= conjugate absorbance at 280nm A280C =corrected conjugate absorbance at 280nm= A280-( A555×0.08) ε280= molarextinction coefficient protein(M-1cm-1)=MWp×E1%/10

应用举例：

用高于抗体摩尔浓度20倍的Cy3-NHS标记 0.1 ml山羊IgG（浓度为1mg/ml）。标记后脱盐去除未标记染料，在PBS中测定(1:5稀释)测定其A₂₈₀和A₅₅₅:

A₂₈₀=0.2906 

A₅₅₅=0.9825

另：山羊IgG分子量为150kDa, E_1%=13.6 or 204000M^-1cm^-1

计算DOL如下：

By Equation 2      Molarity of Cy3 dye=0.9825/150000 M^-1cm^-1=6.55?M

By Equation 3      Molarity of IgG =0.2906-(0.9825×0.08)/204000 M^-1cm^-1=1.039?M

By Equation 1      number of Cy3 per IgG=6.55?M/1.039?M=6.3

则计算Cy3-IgG protein 浓度为（mg/ml）：

By Equation 4     mg/ml=[0.2906-(0.9825×0.08)/1.36]×5=0.78mg/ml

Cy3 NHS酯：

Cy3 NHS酯是标记生物分子氨基的活性染料，此试剂可标记溶解蛋白，多肽和寡核苷酸/DNA。对于比较敏感的蛋白请选择无需任何共溶剂的，可溶于水的磺酸基-Cy3 NHS酯。

分子结构： 

一般性质： 
外观：红色粉末
分子量：590.15 
质谱分析M+增量：474.2
分子式：C₃₄H₄₀ClN₃O₄
溶解性：溶于有机溶剂（DMF,DMSO,二氯甲烷），不溶于水
质控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,功能测试

光谱性质： 
激发波长：555nm
在激发波长下的消光系数：150000Lmol^-1cm^-1
发射波长：570nm
荧光量子产率：0.31

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Cy5 NHS酯：

Cy5在生命科学研究和诊断领域是非常常用的荧光团。此荧光团在红色区域有发射，许多CCD检测器有灵敏度。 
Cy5 NHS酯是标记多肽，蛋白和寡核苷酸的活性染料。染料需要少量的有机共溶剂（比如DMF和DMSO）溶解后进行标记反应。此试剂可以标记溶解蛋白和各种多肽，寡核苷酸的氨基。对于易降解的蛋白，不可使用DMF或DMSO，应选择我们的不需任何共溶剂的sulfo-Cy5 NHS酯，两者具有非常相似的荧光特性。

分子结构：

一般性质： 
外观：暗蓝色粉末
分子量：616.19
分子式：C₃₆H₄₂ClN₃O₄
溶解性：易溶于有机溶剂（DMF,DMSO和氯化物），难溶于水
质控：NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能测试

光谱性质： 
激发波长：646nm
在激发波长下的消光系数：250000 mol^-1cm^-1
发射波长：662nm
荧光量子产率：0.2

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Cy 3.5 NHS酯：

Cy3.5 NHS酯是标记多肽，蛋白和寡核苷酸的活性染料 
Cy3.5 NHS酯可替代Alexa Fluor 594,DyLight 594的NHS酯

分子结构： 

 
一般性质： 
外观：暗紫色粉末
分子量：732.35
分子式：C₄₅H₅₀ClN₃O₄
溶解性：溶于有机溶剂（DMF,DMSO，二氯甲烷），不溶于水
质控:NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能测试

光谱性质： 
激发波长：591nm
在激发波长下的消光系数：116000Lmol^-1cm^-1
荧光量子产率：0.35

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Cy 5.5 NHS酯：

Cy5.5 NHS酯标记多肽，蛋白和寡核苷酸的氨基 
Cy5.5 NHS ester：是近红外染料，除了用于标记多肽，蛋白和寡核苷酸氨基的活性染料，可用于后续的小动物活体成像实验。 
染料可代替Alexa Fluor 680 NHS ester和DyLight 680 NHS ester

分子结构： 

一般性质： 
外观：深蓝色粉末
分子量：716.31
分子式：C₄₄H₄₆ClN₃O₄
溶解性：溶于有机溶剂（DMSO,DMF,二氯甲烷），在水中不易溶解
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试

光谱性质： 
激发波长：673nm
在激发波长下的消光系数：209000Lmol^-1cm^-1
发射波长：707nm
荧光量子产率：0.2

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ROX NHS酯，纯6-异构体：

ROX（罗丹明X又叫R101）是具有多种用途的高荧光性，不感光的罗丹明染料。ROX标记的寡核苷酸探针经常被用于qPCR及具有ROX通道的qPCR设备
标记多肽，蛋白和氨基-寡核苷酸的活性染料，此染料可代替Alexa Fluor 568

分子结构：

一般性质： 
外观：深红色粉末
分子量：631.67
质谱分析M+增量：516.2
分子式：C₃₇H₃₃N₃O₇
CAS号：117491-83-5
溶解性：易溶于有机溶剂（DMF,DMSO），略溶于水
质控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,功能测试

光谱性质： 
激发波长：570nm
激发波长下的消光系数：82000Lmol^-1cm^-1
发射波长：591nm
荧光量子产率：1.0

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Cy7 NHS 酯：

氨基活性Cy7,近红外染料。此试剂可被用于产生Cy7-标记的生物分子，用于后续的小动物活体成像研究，药物(http://www.chemdrug。。ｃｏｍ/)设计及相关实验。Cy7中心加强聚亚甲基链的结构特点，与母结构相比其量子产率提高了20%，增加了其荧光亮度。

分子结构：

一般性质： 
外观：绿色粉末
分子量：682.29
分子式：C₄₁H₄₈ClN₃O₄
溶解性：溶于有机溶剂（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试

光谱性质： 
激发波长：750nm
在激发波长下的消光系数：199000Lmol^-1cm^-1
发射波长：773nm
荧光量子产率：0.3

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Cy7.5 NHS 酯：

Cy7.5是近红外染料，具有长的发射波长，近红外照射容易穿透组织，可用于小动物活体成像实验。Cy7.5中心加强聚亚甲基链的结构特点，与母结构相比其量子产率提高了20%，增加了其荧光亮度。

分子结构：

 
一般性质： 
外观：绿色粉末
分子量：782.41 
分子式：C₄₉H₅₂ClN₃O₄
溶解性：溶于有机溶剂（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试

光谱性质： 
激发波长：788nm
在激发波长下的消光系数：223000Lmol^-1cm^-1
发射波长：808nm
荧光量子产率：0.3

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Sulfo-Cy3 NHS酯：

此染料可溶于水，氨基活性Cy3染料。在水溶液中有效标记蛋白和多肽，无需共溶剂，是低溶解性蛋白和易于降解蛋白的理想选择。
此染料是磺化，亲水性染料。可以代替Alexa Fluor 546和DyLight 549

分子结构：

一般性质： 
外观：深红色晶体
分子量：735.8
分子式：C₃₄H₃₈N₃NaO₁₀S₂
溶解性：极易溶于水，易溶于有机溶剂（DMF,DMSO）
质控：NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能性测试

光谱性质： 
激发波长：548nm
激发波长下的消光系数：162000Lmol^-1cm^-1
发射波长：563nm
荧光量子产率：0.1

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Sulfo-Cy5 NHS酯：

水溶性Cy5 NHS酯，用于标记生物分子的氨基，无需任何共溶剂，因此可以用于标记在有机溶剂中易降解的蛋白和溶解性低的蛋白 
Cy5 是***常用的荧光团之一，与多种设备兼容，比如平板读数仪，显微镜和成像仪 
此染料是高水溶性，可以代替多种用途的Alexa Fluor 647,DyLight 649

分子结构：

 
一般性质：
外观：深蓝色粉末
分子量：761,84
分子式：C₃₆H₄₀N₃NaO₁₀S₂
溶解性：极易溶于水，易溶于有机溶剂DMF和DMSO
质量控制：NMR 1H （95%）和13C,TLC,功能性测试

光谱性质： 
激发波长：646nm 
激发波长下的消光系数：271000Lmol^-1cm^-1 
发射波长：662nm
荧光量子产率：0.2

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Sulfo-Cy7 NHS ester：

一般性质： 
外观：深绿色粉末
分子量：827.94
分子式：C₄₁H₄₆N₃NaO₁₀S₂
溶解性：易溶于水,DMF,DMSO
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试

光谱性质：
激发波长：740nm 
在激发波长下的消光系数：240600Lmol^-1cm^-1 
发射波长：773nm

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