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支原体试剂盒的操作关键和注意事项
发布时间：2021/6/25
支原体试剂盒可用于各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测，应用聚合酶链式反应技术(PCR)对支原体基因保守区域的特异性片段进行扩增检测。
该方法可以在数小时内得到结果，与传统的选择性培养基培养检测方法相比较，本方法更快速，灵敏度和特异性更高，不会出现由于培养法检测时大量培养支原体而可能带来的次级污染的问题，可用于任何类型的荧光定量PCR仪，该试剂盒可快速可靠地筛选细胞培养上清液，适用于科研和工艺研发，检测程序可以在3小时内完成。
支原体试剂盒通过扩增高度保守的操纵子，更具体的是在支原体基因组中扩增编码区，特异性检测支原体，检测到支原体特异性扩增片段，该试剂盒包括引物和标记的探针，能特异性检测所有污染细胞和培养基的柔膜体物种，该引物/探针系统不扩增真核DNA。
试剂盒常压灭菌操作关键：
(1)进锅不挤压：摆放待灭菌的菌种袋必须分层，每层菌种袋不行摆太挤，要留一定空地，不能彼此挤压，不适宜将菌种袋卧叠，要分层立放，以确保蒸汽畅流。为了防止棉塞易潮湿，可在棉塞上盖一层薄膜或油纸，但掩盖物不行太大，否则会影响上基层蒸汽畅流。
(2)及时灭菌：随装随灭。配料到灭菌间隔时间越短越好，防止杂菌自繁，大规模出产时，要分锅灭菌。
(3)攻头：指开端灭菌时要大火猛烧。从开端灭菌到温度达100℃，历时越短越好，不能超过2小时。
(4)控中心：常压灭菌为了防止烧干应留意及时向蒸发锅内补充水，但补水不能造成锅内水中止沸腾，可考虑补充沸水或微量接连补水。
注意事项：
1.工作液对人体有害，请注意防护。
2.固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。
3.支原体检测时，最好用不含抗生素的培养液培养2～3代，这样容易避免假阴性结果。
4.本试剂盒用于6孔板检测时，可以进行50次检测反应。
5.检测支原体污染，可以使用支原体高效细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于细胞进行检测。