本生阐述：ELISA试剂盒该如何操作及怎么计算

　　本生阐述：ELISA试剂盒该如何操作及怎么计算

　　ELISA试剂盒操作步骤

　　1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

　　3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

　　4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　8. 操作过程中除了按照步骤来操作，我们还需要额外准备酶标仪(450nm)，高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL，37℃恒温箱以及蒸馏水或去离子水。

　　9. 要注意试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

　　ELISA试剂盒实验结果计算

　　以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

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