养细胞的人怕的就是细胞污染，细胞一污染，一夜回到解放前，一切都得从头开始，尤其是新手小白，几乎都逃不过细胞污染，避免细胞污染，重要的是操作前和操作时。 

1.  操作前，要保证所有的用品无菌，移液枪枪头、离心管、培养瓶、PBS、培养基、血清等。     高压灭菌，一般要提前一天高压灭菌，灭菌结束后放烘箱烘干，为确保充分烘干，一般需要过夜。要确保一定被高压过，像我们实验室就发生过没被高压的枪头盒放烘箱里了，从高压锅里拿瓶子时一定要拧紧瓶盖，否则就白压了。 

2.操作前紫外灯照射超净台20min左右。实验前打开超净台的通风，用酒精棉球将台面擦一遍，所有进入超净台的东西都要喷酒精。   

3.操作时，所有的玻璃瓶打开前都需在酒精灯上烤一圈，毕竟“病从口入”嘛，将瓶盖放在左侧（清洁区），保证操作时不会从上方经过。 

4.操作时注意枪头，做到悬空加样，尤其是给非无菌的离心管里加东西，给含有细胞的皿里加东西，如你从玻璃瓶里给一个含有细胞的培养皿里加培养基，那么你的枪头就不能伸到培养皿的液体里，否则你的培养基就污染了，除非你每次换枪头。   

5.注意袖口，胳膊，切记不要从打开的瓶，皿上面越过，防止落菌。

6.手拿所有的盖子时，一定不要碰到里面。

7.实验结束后，用酒精灯烧所有的瓶口、盖子，拧紧，用封口膜封好，我们的封口膜一般是提前剪好泡在含有酒精的瓶子里。     一般细胞污染分为细菌、真菌、支原体，支原体在显微镜下肉眼看不到，底下图一为细菌污染，图二为真菌-念珠菌污染

 

细菌污染有时和细胞碎片不容易区别，在高倍镜下都会看到黑色小点在做布朗运动，但是细胞碎片大小不一，培养基清澈透亮，而细菌污染的黑点大小差不多，培养基浑浊，有泥沙感。