体外哺乳动物细胞染色体畸变试验仪
一、 仪器介绍
实验目的：
本试验检测受试物是否引起培养的哺乳动物细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性
实验概述：
在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞,制片,染色,分析染色体畸变。
大部分的致突变剂导致染色单体型畸变,偶有染色体型畸变发生。虽然多倍体的增加可能预示着有染色体数目畸变的可能,但本方法并不适合用于测定染色体的数目畸变。
应用范围
应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域
符合标准：
GB/T 15670.19-2017《农药登记毒理学试验方法第19部分:体外哺乳动物细胞染色体
畸变试验》
二、试验流程
1）细胞培养
选择合适细胞系，在含血清培养基中培养至对数生长期。
2）受试物处理
设置多个浓度组（需包括细胞毒性评估，如50%生长抑制浓度）
阳性对照
阴性对照（溶剂对照）
3.）代谢活化系统（S9混合液）
模拟体内代谢，用于检测需代谢激活的致突变物（如加Aroclor 1254诱导的大鼠肝S9）
4.）采样时间
短期处理:1个细胞周期（通常24小时，含或不含S9）
长期处理:覆盖多个细胞周期（如48小时）
5）染色体制备
秋水仙素（或秋水仙胺）处理:阻断中期细胞。
低渗处理（KCI溶液）使细胞膨胀。
固定（甲醇:冰醋酸=3:1）后滴片，Giemsa染色。
6）镜检分析
显微镜下观察至少200个中期分裂相，记录畸变类型和频率。
三、仪器与试剂
关键仪器：
培养箱、生物安全柜、离心机、显微镜（配备油镜和图像分析系统）
染色体自动扫描仪（可选）
主要试剂:
细胞培养基、胎牛血清
秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。
