一、细胞基本属性 |
细胞名称 | 人大细胞肺癌细胞 |
细胞别称 | NCI-H460 [H460]; NCI.H460; H460; H-460; NCIH460; NCI-HUT- 460; NCI-460 |
细胞货号 | SNL-088 |
细胞种属 | 人 |
生长情况 | 贴壁 |
培养条件 | 1640+10%FBS+1%双抗 |
培养环境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、细胞培养操作 |
换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未*脱落时加2-3ml*培养基终止胰酶消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的*培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足*培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、细胞冻存操作 |
冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培养基+8%DMSO(高手*); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1. 离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3. 将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |