一、细胞基本属性 细胞名称 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞别称 NIH/3T3; NIH-3T3; NIH3T3; 3T3; 3T3NIH; 3T3-Swiss; Swiss-3T3; Swiss/3T3; Swiss 3T3; Swiss3T3 细胞货号 SNL-025 细胞种属 小鼠 生长情况 贴壁 培养条件 H-DMEM+10%FBS+1%双抗 培养环境 air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% 二、细胞培养操作 换液周期 2-3天 培养基体积 T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml 传代比例 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 传代方法 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；
2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；
4.将培养瓶放入37度培养箱消化；
5.消化到细胞间隙变大，但未*脱落时加2-3ml*培养基终止胰酶消化；
6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
7.加新的*培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
8.补足*培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 注意事项 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间
消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 三、细胞冻存操作 冻存液配方 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培养基+8%DMSO(高手*); 冻存规格 200-300万/ml，1ml每管 冻存方法 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 注意事项 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案
Tips：
1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间；
2.注意控制细胞密度，过高或者过低都可能影响细胞状态，不要长时间高密度培养；
我们*使用尚恩生物NIH/3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）**培养基（产品货号：SNLM-025）作为体外培养NIH/3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）的培养基。
