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RNA提取Trizol方法的提取过程

2021年09月29日 14:40来源:上海抚生实业有限公司 >>进入该公司展台人气:139


在分子生物学研究中,有很多实验需要获得目的基因的序列进而确定基因的表达水平,这就需要得到样品中高质量、高纯度的RNA,本文就RNA提取的原理、方法进行总结,并提供了不同类型样品RNA提取的推荐试剂盒。

RNA提取的基本原理

裂解过程:高浓度蛋白质变性剂的裂解方法,是抽提RNA的第一方案。

总RNA的抽提,最重要的是快速裂解细胞膜,而在DNA提取过程中存在的基因组与蛋白质“缠”住的问题,并不会对后续的纯化过程产生大的影响,可以不考虑。

高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜,进而迅速抑制住细胞内的RNA酶,从而保证了RNA的完整性,绝大部分样品的RNA抽提方法,都是以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。

Trizol方法

常用的RNA提取方法是Trizol方法。Trizol内含异硫氰酸胍能迅速破碎细胞,同时使核蛋白复合体中的蛋白变性并释放出核酸,由于释放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同,且分别位于中间相和水相,从而使DNA和RNA得到分离,取出水相后,通过有机溶剂  (氯仿) 抽提及异丙醇沉淀,可得到纯净RNA。

Trizol方法的提取过程:

1. 取离心管做好标记,将一定量的待提取样品应用液氮研磨成粉末状;

2. 加入1mL的Trizol,漩涡混匀,室温静置5min。
一定要将材料研磨充分,且一旦研磨完毕立刻加入Trizol混匀;

3. 加入200µL氯仿,上下颠倒15s,室温静置3min;

4. 12000 r/min 4℃离心15min;

5. 新取一离心管,小心吸取无色上清至该离心管;

样品分三层 (无色上清水相,中间白色层,粉色下层有机相),

6. 加入等体积异丙醇,轻轻混匀,冰浴10~20min,弃上清;

7. 用1mL 75%的乙醇悬浮沉淀,12000 r/min 4℃离心10min;

8. 弃上清,再短暂离心,沉淀于室温下晾干;

9. 加入30-50µL DEPC处理的水溶解RNA。

注:使用一半异丙醇加一半高盐溶液替代纯粹的异丙醇,可以大大降低多糖残留。


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