脉动真空灭菌器是目前一种常用的灭菌器，其操作步骤步骤如下：
1.脉动真空灭菌器必须放置在结实的水平面上。
2. 在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
3. 加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
4. 继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。
在脉动真空灭菌器使用时，要注意以下几点：
1. 待灭菌的物品放置不宜过紧；
2. 必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；
3. 灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖；
4. 灭菌液体时，应将液体灌装在耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花纱赛。切勿使用打孔的橡胶或软木塞；在灭菌结束后，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零后方可排放余气。
5. 对不同类型、不同灭菌要求的物品，如敷料和液体等，切勿放在一起灭菌，以免造成损失。
6. 现在已有微电脑自动控制的高压蒸气灭菌锅，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
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