[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 将纯化的EB病毒抗原预包被于微孔板上,若待测样本中存在EBVAb-IgA,则可与微孔板上预包被的EB—VAg结合,再加入酶联试剂与抗原抗体复合物结合,在显色剂作用下发生显色反应,颜色的深浅与样本中抗体含量呈正相关。
[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝。
[试剂]
1.微孔板
2.样品稀释液
3.酶结合物
4.阴性对照
5.阳性对照
6.洗涤剂
7.TMB显色液
8.终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤]
1.将待检血清编号,用样品稀释液作1:100稀释。
2.根据用量取出相应孔数的微孔板条,其余部分密封后4℃保存。
3.加入已稀释的待检血清,阴性对照,阳性对照各100t.tl至反应孔内,阴性对照、阳性对照设复孔,设空白对照1孔(空白孔不加任何试剂),振荡混匀,37C环境中温育1h。
4.弃去孔中液体,用洗涤液洗涤5次,拍干。
5.每孔加入酶标记物100fA,混匀,37℃环境中水浴1h。
6.弃去孔中液体,用洗涤液洗涤5次,拍干。
7.向每孔加入底物A液和底物B液各2滴,置室温环境中10min,每孔再加终止液50ul终止反应。
8.空白对照(只加蒸馏水200g1)校零,在波长450nm处读取各孔的OD值,凡样品孔OD大于或等于阴性对照孔 2倍,该样品即为阳性。
[正常参考值] EBVAb—IgA阴性
[注意事项]
1.使用前试剂盒应预先在室温环境中平衡30min。
2.试剂盒在2~8℃避光保存,启用后应尽快用完。
3.不同批次的试剂组分不能混用。
4.实验后试剂、血清标本均应视为有传染性物质。
5.用滴瓶滴加时,滴瓶应垂直,用力和速度应均匀;加样后充分混匀。
[临床意义] EBVAb-IgM阳性是EBV近期感染的指标,常见于传染性单核细胞增多症。该抗体在患者感染不久后就转阳,但通常存在时间较短。
EBVAb—IgA阳性见于鼻咽癌,可用于鼻咽癌疗效观察与预后判断;也可见于肺癌、甲状腺癌、慢性鼻咽部炎症,但阳性率一般不高。正常人也有部分阳性,阳性率约为3.4%。
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