大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒辣根过氧化物酶(HRP)是一种糖蛋白,每个分子含有一个氯化血红素 (protonhemin)区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的zui大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的zui大吸收峰是275nm,所以酶的浓度和纯度计算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP纯度(RZ)=A403nm/A275nm纯度RZ(Reinheit Zahl)值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右,zui高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
Elisa试剂盒名称:大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒
Elisa试剂盒:96T/48T
Elisa试剂盒种类:进口Elisa试剂盒分装和原装Elisa试剂盒、国产Elisa试剂盒
ELISA试剂盒实验zui常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定,在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用,ELISA试剂盒因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%),它会降低特异结合,产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液,后者可协助洗涤过程中的封闭。
蛋白封闭液则有所不同,是*的。它们与开放位点结合并封闭,同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过,它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。
抗体浓度须优化
ELISA试剂盒实验我们通常会follow师兄师姐留下来的操作步骤,ELISA试剂盒但是如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体的量。记住,非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。
检测试剂要适量
另一点也很显而易见:切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高,或者未正确稀释,则会导致高背景。也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终止液。
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