未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1检测试剂盒

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未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1检测试剂盒操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉.（稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200 ng/L,800 ng/L ,400 ng/L,200ng/L, 100 ng/L）.
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同）、待测样品孔.在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟.
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用.
5.洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.
7.温育：操作同3.
8.洗涤：操作同5.
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
10.终止：每孔加终止液50μl,终止反应（此时蓝色立转黄色）.
11.测定：以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）. 测定应在加终止液后15分钟以内进行.

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