荧光定量PCR基本原理
• Taqman 技术:该技术以美国 ABI 公司为代表。 PCR 扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸,两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收, PCR 仪检测不到荧光信号; PCR 扩增时(在延伸阶段), Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条 DNA 链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成*同步,这也是定量的基础所在。
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ABI公司
Taqman探针
MGB探针
Sybr green I染料
ROX染料
Taq酶(荧光定量PCR)
热启动酶
热启动荧光PCR定量核心试剂盒
一步法RT-PCR试剂盒
TrizolRNA提取试剂
UNG酶
标准品克隆
定点突变
亚克隆
dUTP
• Beacon 技术:该技术以美国人 Tagyi 为代表。也是加入了荧光探针,但它是 环状的寡核苷酸探针,分别由茎部和环部组成, 两端分别标记 荧光报告基团和荧光猝灭基团,在无靶序列的情况下,探针始终是环状,报告基团的荧光被猝灭基团猝灭,使荧光检测仪检测不到荧光信号;而在有靶序列时,即在 PCR 的退火阶段探针与靶序列结合,使荧光报告基团和猝灭基团分开,这样荧光仪可以检测到荧光,荧光信号的强弱代表了靶序列的多少。