Quick Cell TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（红色）
产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格（元） |
Quick Cell TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（红色） | A5470L2680 | 50 T | -20℃避光 | 4248 |
产品描述
DNA断裂是晚期细胞凋亡的一个特征。DNA在细胞凋亡过程中被激活的内源性核酸内切酶切割成大小不同的片段，并同时产生与切口相同数目的3'-OH末端，末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT)能识别并把脱氧核糖核苷酸连接到切口的3'-OH。TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labeling)是一种通过预先标记脱氧核糖核苷酸（dUTP），间接标记DNA切口3'-OH，进而通过观察荧光反映细胞凋亡情况的检测方法。
李记生物研发的主要在两个方面做了改进：1）在Alexa Fluor的基础上改进了染料，使荧光更为稳定；2）本试剂盒采用不含甲胂酸钠(sodium cacodylate)的专有缓冲液，确保检测结果真实反应细胞凋亡情况。几乎所有的TUNEL细胞凋亡检测试剂盒都包含甲胂酸钠(sodium cacodylate)，这种化合物对细胞有高度毒性，这种高毒性可诱导细胞凋亡，促进DNA降解产生DNA单链或双链片段，使细胞凋亡的检测结果失真。提供了反应所需的全部组份，可用于多功能酶标仪、荧光显微镜或流式细胞仪检测，可用TRITC通道或设置Ex /Em = 550nm/590-650 nm检测信号。
试剂盒组成
组份 | 数量 |
组份A: 100 X Tunel Red | 25 μL |
组份B: 反应缓冲液 | 5 mL |
组份C: 1000 X Hoechst | 50 μL |
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃避光保存，保质期12个月。
使用方法（以96孔板为例）
1. 准备
a. 培养细胞到合适密度。贴壁细胞*密度30000-50000 细胞/孔（96孔板）,悬浮细胞*密度1-2 x 106 细胞/mL。阴性和阳性对照的细胞同时培养或调整到相同 密度，阳性对照根据需要确定是否设置。
b. 准备试剂：4%甲醛细胞固定液；细胞通透液（0.2% Triton X-100 in PBS选做）；DNA酶 I反应液（选做）
2. 固定细胞增加通透性
a. 去除培养液，每孔添加100 μL 的4%甲醛固定液，在室温条件下孵育20-30分钟，去除固定液。
b.根据需要选做：添加100μL/孔的细胞通透试剂（0.2% Triton X-100 in PBS. 需自备），在室温孵育10分钟。
c. 用PBS缓冲液冲洗细胞2-3次
d. 若设置阳性对照，可在TUNEL反应前，在阳性对照样品中加入DNA酶 I，室温孵育30分钟后，与样品一同进行TUNEL反应。
3. TUNEL反应
a. 按下表准备反应混合液（多样品检测可参考表中数据放大，不同细胞系可摸索建立*反应体系。）
反应组份 | 每孔用量 |
组份A: 100 X Tunel Red | 0.5 μL |
组份B: 反应缓冲液 | 50 μL |
总体积 | 50.5 μL |
b. 每孔加入50 μL上一步配好的反应混合液，37℃孵育60分钟。
c. 去除反应混合液，每孔用200 μL的PBS缓冲液冲洗细胞3-5次。
4. 观察荧光信号，可以用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪在Ex /Em = 550nm/590-650 nm条件下观测。
5. (选做)用1 X Hoechst(组份C, Ex/Em=350/460nm)染色做成像分析。
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